广东部分地区鸡瑞利绦虫感染调查与鉴定

瑞利绦虫主要寄生于禽类,是危害陆生禽类最常见的一类绦虫病,多见于平养和散养的鸡,而笼养鸡则较少感染。鸡常见的瑞利绦虫有 3 种,即棘沟瑞利绦虫(Raillietina echi原nobothrida)、四角瑞利绦虫(R.tetragona)和有轮瑞利绦虫(R.cesticillus)。三种瑞利绦虫均分布于世界各地,我国各地的养鸡区域均有此病例发病的相关报道,各年龄阶段的鸡均可感染,但以幼龄鸡易感性强,死亡率高 [1] ,发病率可高达 70%,25~40日龄雏鸡死亡率最高 [2] 。随着人们生活水平的提高,对鸡肉品质的要求也越来越高,放养优质黄羽肉鸡深受广大消费者的欢迎。广东省内黄羽肉鸡多数都采取半圈养半放牧的饲养方式,感染各种寄生虫的机会较多。为了解广东部分地区放养鸡的瑞利绦虫感染情况,特此进行了本次调查。

1、材料与方法

1.1 调查动物来源

本调查的放养鸡来源于广东省不同地区,包括湛江土鸡、清远放山鸡、清远土鸡等,这些鸡在栏舍内饲养到 20 多天龄脱温后,白天放养于运动场或山林上,夜晚回到鸡舍内补饲和休息。

1.2 虫体采集与标本制作

1.2.1 绦虫的采集

将鸡肠道逐一剖解,在肠壁上或者肠内容物中发现绦虫时,用钩虫针或者毛笔挑出虫体(取虫时,千万不要用镊子夹取,否则镊子夹住虫体时,可能致使虫体损坏变性,以至于在显微镜下观察或者制片观察时难于辨别),将虫体置于事先准备好的生理盐水中,并用生理盐水冲洗 4~5 次。小的虫体可直接洗涤,如虫体较大,虫体身上粘连肠道内容物较多时,可用毛笔轻轻刷洗。洗好后,把虫体平整地铺开于载玻片上,置于显微镜下观察。将观察过的绦虫进行分类,然后一部分四角瑞利绦虫和棘沟瑞利绦虫用于制片,其余虫体用 70%的酒精保存于-20℃ 中备用。

1.2.2 绦虫的固定

将绦虫置于水中,使虫体伸展开来,然后从水中将绦虫取出,置于滤纸上使水分吸干。如果虫体较大较厚时,为了方便以后制片,便于观察,可把绦虫置于两载玻片的中间,在载玻片的两头用棉线使其固定,在载玻片的两头用标签纸贴上标签,标签上须写明肠道编号等信息,固定绦虫时用 70%的酒精固定,固定的时间视虫体大小而定,一般先在 70%的酒精中浸泡0.5~3.0 h 后,再移至新的 70%酒精中过夜固定。

1.2.3 绦虫标本的染色及制片

绦虫标本的制作一般需要经过剪短、染色、调色、脱水、透明、封片和干燥等步骤才能完成。具体做法如下: (1)将固定于 70%酒精的虫体取出,解开载玻片两端的棉线,用挑虫针小心把虫体从载玻片上挑至 70%酒精中(钩虫时一定要小心谨慎,避免破坏虫体原有结构),用灭菌后的剪刀将虫体剪至 2~3 cm。(2)虫体的软化,把剪好的虫体从 70%的酒精移至 55%的酒精中 20 min,再从 50%酒精中把虫体移至 35%酒精中 20 min,经 35%酒精软化后,把虫体移至事先准备好的纯水中第一次 20 min,再移至另一平皿纯水中 20 min,目的是洗掉虫体上的酒精。(3)把软化好的虫体移至硼砂卡红染液或者洋红染色液中进行染色,过夜后使虫体染为深红色即可。(4)虫体的脱水,把染色好的虫体挑至纯水中洗涤,洗涤两遍,使染色液彻底被洗掉,然后用酒精进行脱水,经 70%酒精脱水两次,每次时间 20 min;80%酒精脱水两次,每次时间为20 min;95%酒精脱水两次,每次时间 20 min;最后一次脱水用无水乙醇,需经过三次无水乙醇脱水,每次时间 20 min。(5)脱水后的虫体经二甲苯透明数秒。(6)将透明后的虫体,移至干净的载玻片上,加一滴加拿大树胶,加盖玻片固定,然后标本自然风干。

2、结果与分析

2.1 广东省部分地区鸡瑞利绦虫感染调查结果

本次调查共剖检了 143 只鸡,瑞利绦虫检出情况如表 1 所示。

从表 1 可以看出,湛江土鸡瑞利绦虫感染率为 16%,清远放山鸡感染率为 17.8%,清远土鸡感染率为 9.3%,清远走地鸡感染率为13.6%,每只鸡的感染强度约为 1~16 条。本次调查的鸡场基本上都遭受绦虫的感染,总共检测到 20 只鸡被瑞利绦虫感染,收获虫体 49 条(5 条有头节,44 条没有头节),绦虫感染率为14%。

2.2 绦虫标本显微镜检查结果

对采集到的绦虫(5 条有头节)进行显微镜观察和染色制片的观察。采集到的绦虫先置于载玻片用生物学显微镜在低倍镜下进行观察,然后再进行染色制片的观察。观察到虫体特征为:四角瑞利绦虫的头节呈卵圆形,颈节较小较细,头顶上有一个较小的顶突,头节明显可见 4 个长卵圆形吸盘。棘沟瑞利绦虫的头节呈圆球形,头节上可看到一个可伸缩的顶突,棘沟的顶突比四角瑞利绦虫的顶突稍大,颈节也比四角瑞利绦虫颈节大。头节上有 4 个圆形的吸盘,体节清晰可见。从显微镜直接观察和染色制片观察基本可以区分四角瑞利绦虫和棘沟瑞利绦虫,可初步鉴定头节完整的瑞利绦虫中有 2 条棘沟瑞利绦虫和 3 条四角瑞利绦虫(如图 1),对于采集时头节丢失的瑞利绦虫以PCR 方法扩增其核糖体内转录间隔区(ITS)序列并进行了测序分析,结果也鉴定为棘沟瑞利绦虫或四角瑞利绦虫。

3、讨论

通过对广东部分地区的养鸡场进行调查,发现调查的鸡场基本上都遭受绦虫的感染。调查结果表明,瑞利绦虫病是放养鸡感染较为普遍的一类寄生虫病,对养鸡生产危害较大。目前,瑞利绦虫病是国家有关部门规定的重点检测和防疫的慢性病之一,家禽在遭受病原感染患病后,生长发育减缓或生产性能下降,可造成养鸡生产较大的经济损失,因此,应重视做好放养鸡瑞利绦虫病的防控工作。

参考文献

[1] 蒙兆年,王登科,戴新文. 整块组织 HE 染色制片优缺点及适用范围 [J]. 华北理工大学学报(医学版). 2013, 15(6): 802-803.

[2] 陈敬军. 鸡瑞利绦虫病的诊治和预防 [J]. 中国动物传染病学报. 2003, 11(2): 12.

作者:黎盛琴1林瑞庆1,2翁亚彪1,2(1 华南农业大学兽医学院,广州 510642;2 佛山市正典生物技术有限公司,广东佛山 528000)

责任编辑:翁亚彪

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