麻黄鸡属肉蛋兼用型品种，是我国重要的地方优质鸡品种之一，具有外形美观、体态匀称、骨细肉多和肉质细腻等特点，深受消费者的喜爱，具较强的经济开发潜力，但是由于禽白血病（Avian leukosis，AL）的感染严重影响了麻黄鸡的生产性能，也影响了整个产业的发展。禽白血病是指由反转录病毒科 α 病毒属禽白血病 / 肉瘤病毒群病毒（Avianleukosis/sarcoma virus，ALV）引起的鸡的不同组织、细胞的良性及恶性肿瘤性疾病的总称[1,2] 。禽白血病可造成各种肿瘤性死亡或生产性能的下降，是当前严重危害我国养禽业的重要疫病之一。根据囊膜蛋白 gp85 的特异性，禽白血病有 A~J 10 个亚群以及新发现的 K 亚群，其中，从鸡群分离到的包括 A、B、C、D、E、J 和 K 等 7 个亚群 [1,3] 。
针对禽白血病尚无有效的疫苗和药物，对种鸡群实施净化是控制该病较有效的方法 [4] ，也是较关键的防控措施 [5] 。本试验根据胎粪、泄殖腔棉拭子及全血 P27 抗原检测淘汰阳性个体的净化方案，采用不同检测方法对广东某鸡场麻黄鸡配套系核心群进行禽白血病净化，现将试验结果报道如下。
1、材料与方法
1.1 试验动物
广东某鸡场麻黄鸡配套系核心群，包括 A 系、B 系和 C 系。
1.2 检测试剂和仪器
BioTek 酶标仪、Eppendorf 移液器、IDEXX 禽白血病抗原检测试剂盒、苏州某公司的国产禽白血病快速检测试纸条等。
1.3 净化程序和方法
根据崔治中等（2014，2015）的建议 [6, 7] 及本场实际，本场对麻黄鸡核心育种群体在留种前，采集母鸡泄殖腔拭子，加入专用稀释液，置 1.5 mLEP 管中，-20℃冻存，检测前需反复冻融 3 次，样品处理好后用禽白血病快速检测试纸条按使用说明书进行 P27 抗原检测。为了检验禽白血病快速检测试纸条的检测效果，2016 年留种前先取公鸡泄殖腔拭子用禽白血病快速检测试纸条自行检测 1 次，阳性个体直接淘汰，阴性个体再送华南农业大学兽医学院 / 农业部兽用疫苗创制重点实验室病毒分离后进行 P27 抗原检测。检测结果为禽白血病阳性个体淘汰，阴性个体则转移到另一专用隔离舍单笼饲养，并采取必要的生物安全措施，避免再次交叉感染。
阴性个体留种蛋后孵化，孵化时各家系分开单独放置，转移至出雏盘时每枚种蛋单独一个格子，既能尽量防止交叉感染，又可方便禽白血病检测后区分阳性和阴性个体。出雏时采集胎粪加入专用稀释液，置 1.5 mL EP 管中，-20℃冻存，检测前也需反复冻融 3 次，待检。样品处理好后用禽白血病快速检测试纸条或者IDEXX 禽白血病抗原检测试剂盒按使用说明书进行 P27 抗原检测，样品处理和检测必须在24h 内完成。检测结果为禽白血病阳性的个体全部淘汰，阴性个体单独隔离饲养，防止交叉感染。
母鸡开产前，母鸡取泄殖腔拭子用禽白血病快速检测试纸条或者 IDEXX 禽白血病抗原检测试剂盒进行 P27 抗原检测、公鸡取静脉血送华南农业大学兽医学院 / 农业部兽用疫苗创制重点实验室病毒分离后进行 P27 抗原检测，淘汰禽白血病阳性个体。如此循环 3 个世代（2016~2018 年）。
2、结果与分析
2.1 2016 年未净化前 3 个品系 P27 抗原阳性率
从表 1 中可以看出，2016 年留种前用禽白血病快速检测试纸条进行禽白血病检测，未净化前 A 系、B 系和 C 系种公鸡 P27 抗原阳性率分别为 10.68%、21.43%和 19.78%，B 系、C 系母鸡的 P27 抗原阳性率分别为 18.76%、32.67%。为了验证禽白血病快速检测试纸条的检测效果，将 242 个公鸡阴性个体再送华南农业大学兽医学院进行病毒分离检测，A、B 和 C 3 个品系仍然分别检出了 6、9 和 5 个阳性个体，因此，3 个品系种公鸡的阳性率分别为 16.50%、30.61%和 25.27%（表 2）。
2.2 净化效果
2.2.1 种公鸡的净化效果
经过 3 个世代（2016～2018 年）的净化，从公鸡的净化效果来看（表 1），A 系、B 系和 C 系的 P27 抗原阳性率分别从 16.50%、30.61%和25.27%下降到了 5.51%、7.43%和 7.32%，B 系的下降幅度最大，达到了 23.18%。结果表明，经过3 个世代的净化，麻黄鸡核心育种群的 ALV 感染率明显降低。
2.2.2 雏鸡的净化效果
经过 3 个世代的净化（表 1），A 系、B 系和C 系雏鸡胎粪检测的 P27 抗原阳性率 2016 年分别为 4.75%、9.78%和 11.94%，2017 年分别7.18% 、5.43% 和 10.96% ， 而 2018 年 分 别10.72%、9.96%和 12.74%，ALV 感染率波动较大，甚至 ALV 感染率还有提高的趋势，ALV 的净化效果不明显，但如果从 IDEXX 禽白血病抗原检测试剂盒的检测结果来看，B 系雏鸡的P27 抗原阳性率从 9.78%下降到了 5.95%，净化效果也较为明显。
2.3 不同检测方法的效果比较
从表 2 可以看出，禽白血病快速检测试纸条检测结果为阴性的个体再用病毒分离的方式检测 1 次，仍然能够检出阳性个体，2 种检测方法的阴性个体符合率达到 91.74%。从表 1 中2018 年 B 系雏鸡的 P27 抗原阳性率来看，3 个批次的 B 系雏鸡胎粪 P27 抗原阳性率分别为17.38%、5.71%和 6.79%，其中第一批次用禽白血病快速检测试纸条检测，后两批用 IDEXX禽白血病抗原检测试剂盒进行检测，两者的检测结果差异较大。造成这种情况的原因可能是由于禽白血病快速检测试纸条的产品质量不够稳定的原因造成，2018 年 A 系和 C 系雏鸡胎粪的检测结果不够准确，假阳性情况可能较为严重。
3、讨论
崔治中指出，近 10 年来，我国养禽业和禽病界在防控鸡群禽白血病方面获得的重要的经验教训之一是必须高度重视鸡群的种源净化，必须对种鸡群的外源性 ALV 感染实施严格监控和净化，否则其流行和危害的严重性将逐代增强放大 [1] ，2005 年致病性较强的 ALV-J 型禽白血病就已传入我国黄羽肉鸡群体 [5] ；另据李昕键等（2015）研究表明，广东鸡场黄羽肉种鸡群ALV 感染以 ALV-J 为主 [2] ，因此，黄羽种鸡群也必须尽快实施禽白血病净化。
目前，应用于 ALV 的检测方法包括病毒分离、ELISA 试剂盒和 ELISA 试纸条、双抗夹心ELISA、间接免疫荧光技术和 PCR 检测等 [8-12] ，这些方法各有优缺点。病毒分离鉴定是检测ALV 最有效、可靠的技术 [13] ，但此方法检测成本高、时间长，不适合快速及大规模检测，实际生产中常用 ELISA 检测，但其存在有假阳性的缺点 [8] 。本试验中禽白血病快速检测试纸条检测结果为 P27 抗原阴性的公鸡再用病毒分离的方法仍然检出 8.26%的阳性个体，两种检测方法的阴性个体符合率达到 91.74%，表明此禽白血病快速检测试纸条存在一定的假阴性率，但也存在病毒血症阳性的鸡不排毒或检测时不排毒的可能性 [5] ，任何一种方法都不可能在一次采样中检测出所有感染鸡 [14] ，需要进一步的试验验证。张木辉（2016）的研究结果显示两种检测方法的符合率达到 94.6%，结果存在高度相关性。但本试验 2018 年度 B 系同一群体的不同批次雏鸡胎粪的检测结果差异较大，试纸条检测的阳性率最高是用 IDEXX 试剂盒检测阳性率的 3 倍左右。目前 ALV-p27 抗原 ELISA 检测试剂盒的稳定性都比较好 [14] ，因此，B 系第一批次雏鸡胎粪 P27 抗原阳性率高达 17.38%不能反映鸡群ALV 感染的真实情况，禽白血病快速检测试纸条的产品质量稳定性还有待提高。
参考文献
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作者：谢亮1*陈旭锋2陈汉松2（1 珠海市斗门区农业技术推广总站，广东珠海 519100；2 珠海市裕禾农牧有限公 司 ，广东珠海519100）
责任编辑：曹伟胜
