蛋白质是构成生命体的重要物质，也是生物进行新陈代谢的载体，在动物的生命活动中具有重要的营养作用。肉鸡养殖是我国养殖业的重要组成部分，为了提高养殖生产的经济效益，近年来在肉鸡营养与饲料开发方面进行了大量的研究。日粮水平是影响肉鸡生产效益的重要因素，在管理水平确定的情况下，采食量与日粮组成及营养水平密切相关，家禽的进食量较大程度取决于能量和蛋白质的需要量 [1] 。为了满足必需氨基酸 (EAA)的需要量，家禽可能过量进食氨基酸以得到最佳生长 [2] 。有研究表明，日粮中缺乏蛋白质对于肉鸡的健康、生产性能和产品品质均会产生不良影响。日粮蛋白质缺乏, 会首先影响胃肠黏膜及其分泌消化液的腺体组织蛋白的更新, 从而影响消化液的正常分泌,引起消化功能紊乱;蛋白质缺乏,会影响控制和调节生殖机能的重要内分泌腺—— — 脑垂体的作用,抑制其促性腺激素的分泌,导致繁殖功能紊乱;蛋白质与家禽免疫力密切相关,缺乏蛋白质将导致血液中免疫和传递蛋白的合成以及各种激素和酶的分泌量显著减少, 使机体的抗病力减弱,易于发生传染病和代谢病 [3] 。由此可见，蛋白质在机体的正常新陈代谢中发挥着不可替代的作用。
为了探知大日龄武定鸡对日粮蛋白质的利用情况，本试验用 46～65 日龄的武定肉鸡对不同日粮粗蛋白质含量的代谢率进行研究，期望了解肉鸡对日粮粗蛋白质最佳利用率时的含量，探索出最有利于武定肉鸡生长的饲养标准，为更合理地配制肉鸡日粮，提高饲料资源的利用率，同时还可减少排泄物对环境的污染提供依据。
1、材料与方法
1.1 试验动物
本试验所使用武定鸡均来自云南农业大学后山鸡场。
1.2 试剂
硫酸（10%）、稀硫酸、混合催化剂、氢氧化钠、硼酸、盐酸（0.937mol/L）、无水碳酸钠、无水乙醇、甲基红、溴甲酚绿、甲基橙、硫酸铵、葡萄糖、B 族维生素、新城疫 + 传染性支气管疫苗（二联苗）、禽流感疫苗（H5 油苗）、传染性法氏囊病疫苗（三价苗）、新城疫（Ⅳ苗）均为杭州天和微生物试剂有限公司产品；其他试验材料由云南农业大学兽医临床实验室提供。
1.3 试验仪器
分析天平（0.0001g,1 台）、消化管、消化管架、消化炉、KjetecTM 2300 凯式定氮仪（FOSS）、高温炉（550—600℃,1 台）、酸式滴定管（架）（50mL，1 套）、烘箱和干燥皿等。
2、方法
2.1 饲养工作
饲养阶段的划分：饲养分为 3 个阶段，小鸡阶段（脱温期）1～20 日龄，中鸡阶段 21～45 日龄，大鸡阶段 46～65 日龄。整个试验包括小鸡阶段直到大鸡阶段，而对于表观代谢率的研究针对的是 46～65 日龄的大鸡阶段。
分组：按无差异原则将仔鸡分为 2 组，1 组为对照组，2 组为试验组，每组 10 只，仔鸡阶段从购入小鸡的第 2 天进行试验（为试验第一天，试验数据记录中这天为第一日龄），对每组小鸡进行称重（以后每 5 天称重 1 次，每次称重时间相同）。
防疫工作：5 日龄做新城疫 + 传染性气管炎免疫（二联苗，滴鼻）和禽流感免疫（H5 油苗，注射)；13 日龄做传染性法氏囊病免疫（三价苗，滴鼻）；18 日龄再做新城疫 + 传染性气管炎免疫（二联苗，滴鼻)和禽流感免疫（H5 油苗，注射）；28 日龄再做传染性法氏囊病免疫（三价苗，滴鼻）；45 日龄再做新城疫免疫（Ⅳ系苗，饮水）。
2.2 粪便收集
采用全收粪法进行试验，在试验期间全部无损地收集各组试验动物粪便并准确称量，有代表性地采集饲料样品与粪样并准确地分析。本次实验通过在鸡笼下用铺垫上塑料布来承接并收集排泄物，收集的时候先将混入排泄物中的饲料颗粒、羽毛和皮屑仔细拣出，避免污染排泄物，影响结果的准确性 [4] 。
每日定时收集 1 次粪便，将各组当日的全部粪便分别收集称量，充分混合后取样保存，每组的分别取样保存于粪样瓶中，每 5 日的粪样保存于同一粪样瓶中，做好编号，装在同一瓶子中的粪样每日的取样量占该日全部排粪量的比例相同，即每 5 天的取样比例要相同，因此得准确记录每天的排粪量和取样量。取样量根据总的排粪量来定，排粪量随着小鸡日龄的增加而增加，取样的比例逐渐减少。粪样中加入 10%的盐酸或硫酸溶液进行保存，粪便要全淹于溶液中，盖好盖子，然后对每瓶粪样进行称重，记录所收集的粪样重量。
2.3 样品测定
2.3.1 粪便烘干
称样皿重量测定：将称样皿从烘箱中取出，放于干燥器中，冷却至室温，并对其进行称重，记录下每一个称样皿的重量。
称取粪样重量：分别将粪样瓶中的粪样倒于烧杯中充分摇匀，将称样皿置于分析天平上，然后将摇匀的粪样适量倒入称样皿中，做好标记，记录数据，并根据称样皿的重量计算出倒入称样皿的粪样重量。
粪样烘干、称重：将称样皿置于托盘内全部放入烘箱内，65℃的温度进行烘干至恒重。烘干后取出称样皿置于干燥器中冷却至室温，最后对每个称样皿称重，计算出干燥后粪样的重量。
2.3.2 凯氏定氮法测定原理
用凯氏定氮法测定饲料中粗蛋白含量，凯氏定氮法原理是在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵，再加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数得出蛋白质含量，从而计算出粗蛋白含量 [5] 。
2.3.3 样品消化
按仪器使用说明把消化炉在通风厨安放好，接通电源。分析天平上分别称取每个时期的烘干粪样各约 1g 以及各约 1g 的 2 种饲料样品，分别各取 2 份样品，分别无损失地放入消化管中（用纸卷成一纸筒，纸筒伸到消化管底部，从纸筒中倒入样品），放入一粒混合催化剂，加入硫酸 10mL（操作时要戴上劳保手套），消化管上放一漏斗，防止液体过度蒸发，消化炉上进行消化，直至溶液澄清（把通风厨门关好，确保通风厨工作正常，无烟雾逸出）。取出消化管（操作时要戴上劳保手套），放架上冷却至室温。
2.3.4 消化液中氮元素含量的测定
使用 FOSS KjetecTM 2300 凯式定氮仪测定样品中含氮量。
3、结果
3.1 粪便样品重量还原
饲养阶段在粪便收集时只能得到总排粪量和样品采集量的数据，为了避免粪样中氮逸失，保存时在其中加入了盐酸溶液。而在测定样品中粗蛋白质含量时又需要用干粪样进行测定，需将粪样烘干，所以粪样的重量发生过再次变化。为了用干粪样的粗蛋白质含量计算出新鲜粪样的粗蛋白质含量，需要将干粪样的重量还原为新鲜粪样的重量。粪便样品加酸前后变化比值 K 1 ，按下式计算：
K 1 ＝实际收集的重量÷加酸后重量
再算出烘干前（加酸后）与烘干后的样品重量变化比值 K 2 ，按下式计算：
K 2 = 烘干前样品的重量÷烘干后样品的重量
最后算出总的变化比值 K= K 1 ×K 2 。
计算各阶段粪样重量变化结果见表 1。
3.2 样品粗蛋白质含量
烘干粪样的粗蛋白质含量 P 1 按下式计算。
P 1 （%）=N×6.25×1/1000×100%
式中：P 1 – 烘干粪样的粗蛋白质含量；N- 定氮仪测出的每克烘干粪样的含氮量（mg/g）。
鲜粪粗蛋白质含量 P 2 按下式计算。
P 2 （%）=P 1 ÷ K
式中：P 2 – 鲜粪的粗蛋白质含量；K- 粪样重量变化。
各粪便样品的粗蛋白质含量见表 2。
饲料样品与实际投喂的饲料的含水量相同，可直接进行测定，不需要在烘箱里干燥，所以饲料样品粗蛋白质含量 P 按下式计算。
P（%）=N×6.25×1/1000×100%
式中：P- 饲料的粗蛋白质含量；N- 定氮仪测出的每克饲料样品的含氮量（mg/g）。饲料样品的粗蛋白质含量见表 3。
3.3 饲料食入和粪便排出量
饲料食入量即为肉鸡每天的采食量，根据每天的加料量和剩余量计算出食入量；粪便排出量为每天收集的粪便总量。
大鸡阶段各组每天的饲料食入量和粪便排出量见表 4。
3.4 粗蛋白的食入量和排出量
根据饲料中粗蛋白质的含量和每天饲料食入量，可计算出各组每天蛋白质的食入量。粗蛋白食入量(g)= 日粮量×饲料中蛋白质含量
粗蛋白的食入量见表 5。
由于机体不能将食物中的营养元素完全吸收，还有一部分会随着代谢产物的排除而排出，根据每天的排粪量和粪便中粗蛋白质的含量，按下式计算出每天粗蛋白质的排出量。
蛋白质排出量 = 每天排粪量×粪便中粗蛋白质含量
粗蛋白质的排出量见表 6。
3.5 粗蛋白的表观代谢率
根据肉鸡对粗蛋白质的食入量和粗蛋白质的排出量，其表观代谢率按下式计算。
表观代谢率（%）=（蛋白质食入量 – 蛋白质排出量）/ 蛋白质食入量×100%
46～56 日粗蛋白质的表观代谢率见表 7。
根据表 7 中肉鸡每天对粗蛋白质的表观代谢率，计算该时期各组每 5 天的粗蛋白平均表观代谢率，结果见表 8。
3.6 料肉比
根据每 5 天饲料的食入量和每 5 天经行称重得出重量变化，按下式计算出料肉比。
料肉比＝每 5 天食入饲料÷每 5 天增重
该时期各组每 5 天的料肉比见表 9。
4、分析讨论
4.1 表观代谢率分析
如前所述，代谢率是衡量动物对所吸收的营养物质利用率高低的指标，对粗蛋白代谢率高，表明其对所吸收的蛋白质（实为氨基酸）利用程度就高。从表 8 可知，对照组中，46～50 日龄鸡只对粗蛋白表观代谢率为 56.53％,51～55日龄的为 60.03％,56～60 日龄的为 55.55％，61～65 日龄的为 53.47％。而试验组中，46～50日龄的为 65.32％,51～55 日龄的为 71.45％,56～60 日龄的为 62.58％，61～65 日龄的为75.04％，可见，在这几个时段中试验组的代谢率均高于对照组的。用 SPSS 13.0 对表 7 中的 2组表观代谢率数据进行 t 检验，检验结果显示两组数据差异极显著（α＝0.05），这说明日粮粗蛋白质含量越高，其合成代谢水平就越高，即高蛋白质水平的日粮可促进肉鸡的生长发育。从表 8 中还可看到，2 组鸡只在这几个时段中，虽然在 56～60 日龄时段里的平均代谢率略低于前两个时段的，但总的趋势为代谢率随着日龄的增加而提高，这表明在 46～65 日龄阶段肉鸡仍处于快速生长时期，其合成代谢水平仍然较高。至于 56～60 日龄时段里的代谢率略有所下降，可能是因为在收集粪便时没有将撒出的饲料捡干净，粪便中含有饲料的失误差所至。
从表 2 可知，对照组中，46～50 日龄粪中粗蛋白含量为 5.45％,51～55 日龄的为 4.75％,56～60 日龄的为 3.86％，61～65 日龄的 为5.63％。而试验组中，46～50 日龄的为 7.55％,51～55 日龄的 为 6.15%，56～60 日 龄的 为7.79％，61～65 日龄的为 5.12％。除了第四时段外（这时段的数据可能是因试验误差造成），其余 3 个时段粪中粗蛋白含量均为试验组的高于对照组的，表面上看，肉鸡采食高蛋白质日粮时，蛋白质的排出量会增加。但从上述代谢率分析可知，高蛋白质日粮的代谢率高于低蛋白质日粮的代谢率，也就是说，在获得同等蛋白质沉积量时，饲喂低蛋白质日粮需要更长时间，投喂量更大，与饲喂高蛋白质日粮时相比，同等沉积量条件下蛋白质的排出量会更高。
本试验得出 46～65 日龄铁脚麻肉鸡对粗蛋白质含量为 14.27%的饲料的表观代谢率为56.39%，与王峰等对 28～56 日龄的雉鸡进行研究，得出雉鸡对日粮蛋白质的表观代谢率为58.01%，较为接近，差异较小，造成差异的原因可能是因为所饲养的肉鸡品种不同。本试验得出 46～65 日龄铁脚麻肉鸡对高粗蛋白含量的饲料和低粗蛋白含量的饲料的表观代谢率差异显著，这与高权利等对 45 日龄艾维茵肉鸡研究结果不同，原因一方面可能是因为试验所研究的肉鸡品种不同，不同品种的肉鸡对粗蛋白质的表观代谢率存在差异；另一方面，可能是因为饲养环境存在差异，在不同的生长环境下，肉鸡对粗蛋白质的表观代谢率存在差异，有待进一步研究。
4.2 料肉比分析
料肉比(FCR)是指饲养的畜禽增重 1kg 所消耗的饲料量，它是评价饲料报酬的一个重要指标，也是编制生产计划和财务计划的重要依据。料肉比高说明用的饲料多，但增长的肉少；反之，料肉比低说明用的饲料少，但增长的肉多。由表 9 可知，对照组中，46～50 日龄料肉比为 3.31，51～55 日龄的为 3.29，56～60 日龄的为 3.27，61～65 日龄的为 3.48。而试验组中，46 ～50 日 龄 的 为 2.64，51 ～55 日 龄 的 为2.66，56～60 日龄的为 2.84，61～65 日龄的为2.96。1 组的料肉比平均值为 3.3 左右，2 组料肉比平均值为 2.7 左右。理论上讲，料肉比越小，相应地经济效益就越好，生长效率高的肉料比一般为 2.2 左右，本实验饲养的肉鸡料肉比都大于该值，市场上所卖的肉鸡鸡肉价格一般为20 元 /kg，肉鸡配合饲料价格为 4.0～4.5 元 /kg左右，收益大约 7 元。在相同增重量下，低粗蛋白质含量的饲喂条件下，所需饲喂时间更长，饲料需求量更大，大大提高了饲喂成本，所以在高粗蛋白质含量的饲喂条件下既能节约饲料量，又缩短了生长周期，获得的经济效益越高。
参考文献
[1] 宋雨轩,姚军虎,王继龙,等.日粮粗蛋白质水平及添加尿素对肉鸡生产性能的影响[J].2005,33(2):43-37.
[2] Summers J D，Spratt D，Atkinson J I ．Broiler weight gain and carcase composition when fed diets varying in amino acid balance ，dietary energy and protein level [J].Poultry Science，1992，71：263-273．
[3] 田亚东. 固始鸡能量和蛋白质营养需要量的研究[D].郑州:河南农业大学,2002,10-11.
[4] 杨凌.产蛋鸡饲料能量、蛋白质评定方法研究之一[D].陕西:西北农林科技大学,2010,1-2.
[5] 徐佳璐,战海枫,陈义飞.饲料中粗蛋白测定的方法[J].养殖技术顾问,2014,3:49.
作者：戴剑涛1王广龙1王晓枫1徐家付1姜梦1王皓然2白文顺1杨亮宇**（1.云南农业大学动物科学技术学院，昆明 650201；2.大理市剑川县老君山青花鸡产业发展有限责任公司，云南大理 671000
基金项目：高原优质地方武定鸡推广与养殖技术服务 (2015GA830002)
作者简介：戴剑涛（1992—），男，江西吉安人，硕士研究生，研究方向为兽医临床诊断， 916290086@qq.com ** 通讯作者：杨亮宇（1969—），男，教授，云南大理人，研究方向为动物营养代谢病，yangliangyu2004@163.com
责任编辑：董泽敏
