Study on the Clinical Effect of Foam Disinfectant in Chicken Farm
ZHOU De-gang,ZHANG Xiao-dong,GAO Yan-yan,LI Zhao-bin，Ma Sui-ying
(1.National Research Center For Veterinary Medicine, 2.Luoyang Huizhong Animal Medicine CO,.Itd, 471000)
Abstract：The aim of this study was to evaluate the germicidal efficacy of a foam disinfectant in scaled chicken farms. The bacterial quantitative test method was used to observe the on-the-spot disinfection effect of 100 times diluted Glutaral and Benzalkonium Bromide Solution. After the exposure time of 30 mins, the mean bactericidal rates on the ground, wall,and trough were 99.98%, 100% and 99.95%, respectively. The results indicated that foaming Glutaral and Benzalkonium Bromide Solution showed remarkable activities against microorganism in chicken house. Therefore, Glutaral and Benzalkonium Bromide Solution is suitable for foaming disinfection in scaled chicken farms.This method of foam disinfection is worthy of clinical application.
Key words: Foam disinfectant, glutaraldehyde benzalkonium bromide solution, disinfection effect;
随着中国现代养猪业向着规模化、集约化方向发展，饲养密度的增加提高了传染性疾病传播机率和速度，控制致病微物在畜禽舍中的传播和扩散成为保障动物群健康、提高生产效率的有效途径[1]。传统清洁消毒方式包括机械铲除、高压水枪冲洗等方法，然后使用消毒剂进行喷洒或喷雾消毒。实践证实，这些方法均存在劳动强度过大、清洁消毒时间长、清洁效果不彻底及水资源浪费严重的弊端[2]。车辆消毒对于畜禽养殖企业的生物安全尤其重要，因为车辆是动物疫病传播的主要源头，另外饲养笼具、墙面由于与消毒剂接触时间短不易达到良好的消毒效果，是养殖场消毒的薄弱环节。泡沫型消毒剂有许多优点，对光滑表面的附着能力强，药物用量少，节约成本，特别适合应用于对车辆、地面、建筑物墙壁等物品表面的消毒。优点为能附着、用量少、药物分散均匀及效果较好[3]。为了观察该泡沫消毒剂对鸡场墙壁、食槽和地面的消毒效果，参考中华人民共和国农业部《兽用消毒剂技术规范》(1992 年版)[4]，对其进行了现场 消毒试验，研究并客观评价该消毒剂消毒效果，旨在为规模化养殖场临床消毒应用提供依据。
1、材料
1.1 材料和试剂
消毒剂：戊二醛苯扎溴铵溶液，生产厂家：洛阳惠中兽药有限公司，批号20160401；
消毒设备：自吸式泡沫清洗一体机，生产厂家： 青岛尚芳环境科技有限公司， 型号SF-PM08A；
甘氨酸： 郑州派尼化学试剂厂， 批号20160729；
吐温-80：郑州派尼化学试剂厂，批号20150401；
小牛血清：郑州益康生物工程有限公司，批号201702025；
改良马丁琼脂培养基：北京奥博星生物技术有限责任公司，批号20170125；
其他试剂均为分析纯或生化试剂。
1.2 试验试剂的制备
1.2.1 10%血清改良马丁琼脂平板的制备
称取改良马丁培养基16 g 至锥形瓶中，加500 mL 纯化水溶解，121℃ 高压蒸汽灭菌15 min。冷却至60℃左右，在超净工作台内无菌加入小牛血清55.5 mL，摇匀，倾注平皿，吹干后收起。4℃冰箱保存，备用。
1.2.2 中和剂（采样液：0.5%甘氨酸+4%吐温-80）的配制
将吐温-80 40mL、纯化水960 mL 于121℃高压蒸气灭菌30 min。取出后，待吐温-80、纯化水温度降至60℃左右时，移入超净台中配制中和剂。
称取甘氨酸5 g，置于100 mL 小烧杯中，加入40 mL 灭菌纯化水溶解，用0.22μm 无菌针筒式滤头过滤除菌后与剩余的灭菌纯化水混合，再加入40 mL 吐温-80，混匀，即得。
1.2.3 生理盐水的配制
称取氯化钠4.508 g，用少量纯化水溶解后，定容至500 mL，于121℃高压蒸汽灭菌30 min 备用。
1.3 试验物品
无菌棉拭子、一次性无菌平皿、记号笔、5×5 cm2 规格板、涡旋混匀器、喷雾器、胶鞋、工作服。
1.4 试验仪器与设备
超净工作台：上海博迅实业有限公司医疗设备厂，型号SW-CJ-2FD。
电热恒温培养箱：宁波莱福科技有限公司，型号PHX。
四通道电子定时器、计时器：深圳市追日电子科技有限公司。
全自动立式电热压力蒸汽灭菌器：上海博迅实业有限公司医疗设备厂，型号YXQ-LS-100A。
可调微量移液器：10 ～100μL，100 ～1 000μL，500～5 000μL，德国艾本德公司产品。
涡旋混合器：江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司，型号QL-866。一次性无菌平皿：扬州市创新医疗器械厂产品。
2、试验方法
2.1 试验场地的选择
选择洛阳成大蛋鸡场，鸡舍1 星期内未饲养过鸡，用自来水冲洗地面，自然干燥后进行试验。
2.2 消毒剂稀释方法
戊二醛苯扎溴铵溶液1∶100 倍稀释，取50 kg 自来水，加入500 mL 戊二醛苯扎溴铵溶液，搅拌均匀。
2.3 采样部位
蛋鸡舍采地面、墙壁，每个部位都采前、中、后3 个采样点。
2.4 试验具体操作
2.4.1 标记及消毒
分别在鸡舍不同采样部位各画出3 个区域，每个区域2 个面积为5×5 cm2 的采样点，分别标记为消毒前、消毒后。先对消毒前区域进行采样。然后取50 kg 自来水，加入500 mL 戊二醛苯扎溴铵溶液，搅拌均匀。自吸式泡沫清洗一体机（型号：SF-PM08A），打开机器和泡沫喷枪，待压力达到0.8 兆帕以上即可泡沫消毒，于消毒后30 min 再进行采样。
2.4.2 采样
将无菌棉拭子于中和液中沾湿，在管壁上挤去多余水分，在面积为5×5 cm2 的采样区域进行涂抹采样，横竖各用力擦拭10 次，边采样边转动棉拭子，采样结束时，将拭子棉花端剪入含10 mL 无菌生理盐水的离心管中，密封离心管，将离心管在涡旋混匀器以2 500 rpm 混匀30s，将菌洗脱，备用。
2.4.3 细菌计数
消毒前采的样品洗液用无菌生理盐水做10 倍梯度稀释，稀释至10-3。对消毒前的样品10-2、10-3 稀释液及消毒后洗脱液原液、10-1 稀释液进行细菌计数。用移液器吸取100μL 样液于含有10%血清的马丁琼脂平板上，用涂布棒均匀涂布，每个样品做2 个重复。涂布结束后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养24h，进行细菌计数，并计算杀菌率。
杀菌率%=(消毒前活菌数－消毒后活菌数)/ 消毒前活菌数×100％
3、结果与结论
3 组消毒剂对鸡舍自然菌表面现场消毒试验结果见表1，从表中可以看出，戊二醛苯扎溴铵溶液1∶100 倍稀释进行泡沫消毒杀菌率均在99.93%～100%之间。对鸡舍墙面的消毒效果优于地面和料槽，分析可能是由于墙面经过冲洗细菌总数较少，致使消毒时杀灭率有较小差异。
另外，环境温度、采样点的粗糙程度、洁净程度也是影响消毒效果的重要因素，温度越高、表面越光滑、越洁净，消毒效果越强。自然菌表面现场泡沫消毒试验结果显示，戊二醛苯扎溴铵溶液在100 倍稀释时，杀菌率可达99.93%以上。因此，在临床上拟推荐戊二醛苯扎溴铵溶液100 倍稀释用于畜禽养殖场泡沫环境消毒。
4、分析讨论
使用泡沫型消毒剂进行消毒可以大大延长消毒剂与墙壁、地面、车辆、养殖笼具和产床等表面的病原微生物的接触时间，增加消毒剂的消毒效果。而普通的喷雾法或喷洒法在喷后消毒液随即流到地面，大量的消毒液被浪费了，与病原微生物接触时间短，效果不理想。另外泡沫消毒用水量少，废水排放量少，减轻对环境的污染[5]，泡沫消毒被广泛应用于美国和日本养殖场和孵化场。针对养殖场车辆消毒也有企业研制出全自动泡沫车辆消毒通道，具有启动时间短、产泡量多、扬程远、挂壁时间长及清洗消毒效率高等特点[6]，取得了较好的消毒效果。苗建华等[7]比较研究了戊二醛双链季铵盐复方消毒剂对鸡场泡沫消毒和熏蒸消毒的消毒效果，结果表明对细菌和病毒消毒效果好，可全面替代甲醛和高锰酸钾的熏蒸消毒。唐金库等[8]报道以过氧化氢和季铵盐为活性成分的泡沫消毒剂的杀菌效果，结果表明该泡沫消毒剂稀释100 倍(折合过氧化氢350 mg/L 与双链季铰盐100 mg / L) 5 min 内可杀灭载体上细菌繁殖体和真菌，达到消毒合格要求。
本研究结果表明，戊二醛苯扎溴铵溶液1∶100 稀释进行泡沫消毒，临床使用杀菌效果能够达到消毒合格要求，同时能够节约水资源，与病原微生物接触时间长能够减少消毒剂的使用量，因此采用泡沫消毒是一种理想消毒方式，值得大力推广和应用。
参考文献
[1] 雷云峰,康润敏,曾凯，等.市售15 种猪场消毒剂消毒效果的比较[J]. 畜牧与兽医,2015,47(4):100-103.
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[3] 朱大兰.过氧化氢泡沫消毒剂的实验研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,2005 年06 月01 日.
4农(牧药) 字第101 号中华人民共和国农业部． 兽用消毒剂鉴定技术规范［S］.
[5]徐凤春.国外两种新的消毒法[J].畜牧兽医科技信息，1998,05:7-8.
[6]唐金库、林碧亮、魏文英.全自动泡沫车辆消毒通道的研究[J].中国猪业，2016，2：73-75.
[7]苗建华; 李福明; 王毅等.一例甲醛熏蒸和泡沫消毒的效果比较[J]. 现代农村科技,
2015.40-41.
[8]唐金库，林碧亮.一种复方泡沫消毒剂杀菌效果的观察[J]. 中国消毒学杂志,2012,29 (4): 273-276.
作者 ：周德刚1、2，张晓东1、2，高艳艳1、2，李召斌1、2,马随营2 （ 1.国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳471003；2.洛阳惠中兽药有限公司，河南洛阳471013 ）
作者简介：周德刚（1981- ），男，硕士，高级兽医师，从事新兽药的研究与开发工作，E-mail:zdegang_621@126.com
责任编辑：徐成刚
