北芪五加颗粒对雏鸡新城疫疫苗免疫应答及生长发育影响

在畜禽疫病日趋复杂、不断发展的今天，通过疫苗免疫来控制疾病的发生是重要而有效的手段，但是在养禽生产中普遍存在疫苗免疫接种预防效果不佳，以及用药量逐渐加大而仍未达到理想的治疗和预防效果的问题^[1]，甚至有些弱毒疫苗存在生物安全隐患，如弱毒苗经活体继代，毒力增强等^[2] 。因此，研究免疫增强剂提高家禽的内在免疫机能，增强其自身抗病能力，具有重要的意义。本试验以海塞克斯粉雏鸡为试验动物，随机分成5组：黄芪多糖为对照药物组，北芪五加颗粒高、中、低3个剂量组和空白对照组，通过检测不同日龄的免疫器官指数、新城疫抗体效价，观察北芪五加对雏鸡新城疫疫苗免疫应答和生长性能的影响，评价北芪五加颗粒对鸡免疫功能的影响。

1、材料与方法

1.1材料

1.1.1试验药品和试剂

北芪五加颗粒，商丘爱己爱牧动物药业有限公司提供（批号：20110203）；黄芪多糖粉，北京生泰尔生物科技有限公司（批号：20111123）；鸡新城疫LaSota系冻干疫苗，瑞普(保定)生物药业有限公司(批号：111229)；肝素钠注射液，天津生物化学制药厂（批号:20110812)；鸡新城疫抗原，中国兽医药品监察所。

1.1.2主要仪器设备

电热鼓风干燥箱，北京市永光明医疗仪器厂；微量血凝板，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；恒温培养振荡器（ZHWY-103D），上海智城分析仪器制造有限公司；电子天平（MR200A），上海第二天平仪器厂；超净工作台（LGJ-10），北京四环科学仪器厂。

1.1.3试验动物

1日龄海塞克斯粉蛋公雏350只，2012年3月29日购自石家庄良人牧业。使用合格的雏鸡饲料，按中华人民共和国农业部颁布《NY/T33-2004蛋鸡饲养标准》饲养至7日龄。以活泼健康、体重均匀为标准，选择出300只供试。

1.2方法

1.2.1试验鸡分组与管理

300只7日龄海塞克斯粉蛋公雏随机分成5组，每组60只。北芪五加组（A组、B组、C组）于7～14日龄对水饮用北芪五加颗粒，高、中和低3个剂量分别为4.0g/kg、2.0g/kg和 1.0g/kg饮水；黄芪多糖对照组（D组）同时段饮水添加黄芪多糖粉（200mg/kg）；空白对照组（E组）不添加任何药物。各试验组于7日龄经测定母源抗体滴度后，用LaSota活疫苗滴鼻、点眼免疫，免疫剂量为1.5羽份/只；两周后采用LaSota活疫苗滴鼻、点眼二免，免疫剂量为2羽份/只。试验期间采用笼养，鸡自由采食和饮水，1～14日龄采用红外线灯保温，全日制光照。试验动物分组及处理见表1。

1.2.2测定指标及方法

ND抗体水平测定：将各组供试雏鸡分别于7、14、21和28日龄各取15只心脏采血，分离血清，用微量血凝（HA）和血凝抑制试验（HI）检测鸡新城疫抗体^[3]。7日龄采血主要目的是检测母源抗体水平，以判定是否可以进行新城疫疫苗免疫。免疫器官指数测定：分别在14、21和28日龄每组随机抽取15只，心脏采血后（用于分离血清测定抗体效价），剖杀采集法氏囊、胸腺和脾脏，滤纸吸干表面水分后，用电子天平称重，根据免疫器官与体重之比计算法氏囊指数、胸腺指数和脾脏指数。计算公式为：免疫器官指数=免疫器官重（mg）/体重（g）。对生长性能的影响：分别于14、21和28日龄，各组随机取15只称重，观察各阶段鸡体重增长情况。计算公式为：料重比=期末耗料量（g）/(期末体重－初始体重)（g）。此外，试验期间仔细观察和记录试验鸡只的精神、食欲、粪便及发病、死亡等临床状况。

1.2.3统计方法

采用SPSS12统计软件对所得数据进行统计分析。

2、结果与分析

2.1新城疫抗体效价的动态变化

各组雏鸡7日龄的新城疫抗体水平均在4log₂以下，且各组之间差异不显著，所以可以进行新城疫的疫苗免疫。用药各组的新城疫抗体效价与空白对照组相比均有提高，21日龄时B组与E组相比差异显著(P<0.05)，C组和D组与E组相比差异极显著(P<0.01)；28日龄时B组、C组和D组的抗体效价均明显高于E组，差异极显著(P<0.01)。各用药组之间，除B、C组间21日龄时差异显著(P<0.05)外，其余各时间段两组间均无统计学意义，与D组无差异显著性。详见表2。

注：同列内大写字母不同组间差异极显著（P<0.01）；小写字母不同组间差异显著（P<0.05），下表同。

2.2对免疫器官指数的影响

2.2.1对胸腺指数的影响

整个试验过程中，雏鸡的胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官均未见明显眼观变化。14日龄胸腺指数C组高于A组和E组，差异显著（P<0.05），其余各组间差异不显著；21、28日龄时除A组外，其余各用药组与E组相比均有明显提高，差异达到极显著（P<0.01）。各用药组之间，除28日龄C、A组间差异显著外，其余各组间差异不显著，无统计学意义。结果见表3。

2.2.2对法氏囊指数的影响

北芪五加颗粒各剂量组的法氏囊指数与空白对照组相比均有提高。C组与E组相比，在21日龄达到显著水平（P<0.05），28日龄差异极显著（P<0.01）；B组在28日龄与E组相比差异 显著（P<0.05），B、C组之间差异不显著（P> 0.05）。结果见表4。

2.2.3对脾脏指数的影响

在14日龄各用药组与空白对照组相比较无显著差异；21日龄时B、C、D组与E组差异显著（P<0.05）；28日龄时B、C、D组的脾脏指数明显升高，与E组相比差异极显著（P<0.01）。但B、C组两组之间差异不显著。结果见表5。

2.3对增重和料重比的影响

试验期间，各组鸡精神状态良好，食欲、粪便正常，无异常表现。14、21日龄，各组平均体重相近，差异不显著(P>0.05)；28日龄，B、C组平均体重高于对照组，差异显著(P<0.05)，在28日龄料重比中，以B、C组最优，表明北芪五加颗粒高、中剂量添加饮用能促进雏鸡的生长发育，提高日增重，增加经济效益。结果见表6。

3、讨论

3.1北芪五加颗粒对雏鸡新城疫抗体水平的影响

体液免疫是由B淋巴细胞介导的一种重要的特异性免疫反应，是机体抗御传染病的主要因素之一^[4]。禽类机体外周血液中的抗体在体内可发挥多种免疫功能，是衡量体液免疫功能的重要标志。本试验证实高、中剂量的北芪五加颗粒对雏鸡新城疫抗体水平有明显的促进作用。在给药后7天（14日龄）北芪五加颗粒高、中剂量组的抗体效价与对照组相比差异不显著，随着饲养时间增加，到第21日龄达到差异显著水平，28日龄达到峰值（平均7.4log₂），说明北芪五加颗粒作用于机体免疫器官、提高抗体水平需要一定的时间和过程。

3.2北芪五加颗粒对雏鸡免疫器官指数的影响

胸腺是鸡的一级免疫器官，是雏鸡血液中淋巴细胞的来源^[5]；法氏囊是禽类特有的体液免疫中枢器官，是B细胞分化发育的主要场所^[6]；脾脏属外周免疫器官，它是T、B淋巴细胞定居和对抗原刺激进行免疫应答的场所之一，富含捕获和提呈抗原的巨噬细胞、树突状细胞和郎格罕氏细胞^[7]。研究认为胸腺、法氏囊及脾脏的重量可用于评价雏鸡的免疫状态，其绝对重量和相对重量的增加，说明机体的细胞免疫和体液免疫机能增强^[8]。本试验结果表明，北芪五加颗粒各试验组的免疫器官指数大多显著高于对照组，说明北芪五加颗粒能够促进雏鸡胸腺、脾脏和法氏囊的发育，进而影响机体的免疫机能。因而有上述新城疫抗体效价显著高于对照组现象。这与王德云^[9]等将中药成分与IL-2联用可以促进鸡免疫器官发育，李宏全^[10]等研究发现黄芪多糖有对鸡新城疫和法氏囊疫苗免疫促进作用，高桂生^[11]等利用中药“疫佳灵”可以增加鸡免疫器官的相对质量，胡松华^[12]等利用中药复方促进鸡免疫器官的发育以及王福传^[13]等研究中药复方对鸡的脾脏质量、法氏囊质量有显著影响等报道相一致。可见，中药可通过促进动物免疫器官发育从而发挥提高动物机体免疫力的作用。

3.3北芪五加颗粒对雏鸡增重和料重比的影响

试验结果表明，北芪五加颗粒中、高剂量组平均体重均高于对照组，料重比明显低于对照组，说明北芪五加颗粒能够促进机体组织的生长发育，提高增重率和饲料利用率。

4、结论

北芪五加颗粒对雏鸡具有促进免疫器官发育，提高增重，增强新城疫疫苗免疫效果的作用。给药方式为：混饮，剂量为：2.0g/kg，连续用药7天。

参考文献

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作者：赵留涛^1,2，袁之润¹，吴洪银²，吴冠连²，吴春丽³（1.河南 省商丘爱己爱牧生 物科技股份有限公司，河南虞城 476300；2.郑州爱 己爱牧生物技术有 限公司，郑州 450001；3.郑州大 学药学院，郑州 450001。）

作者简介：赵留涛（1985-），男，河南郑州，硕士，主要从事动物疾病的防治与兽药安全性评价工作，Email:zhaoliutao2005@163.com。

*通讯作者：吴春丽（1970-），女，河南睢县，副教授，博士，硕士生导师，研究方向：新药的研究与开发，Email：kedi2009@126.com。

基金项目:国家重点研发计划(No.2017YFD0501401)/河南省科技开放合作项目(No.172106000008)/智汇郑州“1125”创业紧缺人才项目。

责任编辑：曹伟胜