2018年9月，在贵州省某养殖户饲养的蛋鸡中，有126羽蛋鸡患病，笔者从采集的患鸡病料中未分离培养出致病性细菌，将病料直接进行分子生物学鉴定，确诊为禽白血病病毒感染。现报告如下。
1、发病情况及临床症状
贵州省某养殖户饲养有195日龄的白羽蛋鸡1200羽，先后有126羽蛋鸡发病，死亡89羽，发病率10.5%，死亡率70.6%。临床症状以皮肤血管瘤、产蛋率下降为主要特征，部分鸡的鸡冠萎缩，头部、背部、胸部、腿部及翅膀可见1.2～2.5cm的血疱，褐紫色，质地柔软有一定的弹性，与周围皮肤界限清楚，血疱破裂后流血不止，血疱周边的羽毛被大片血迹污染。将病死鸡剖解可见部分发病蛋鸡的肝、脾和肾肿大，腺胃乳头肿胀。
2、实验室诊断
2.1病料采集
无菌操作采集病死鸡的血管瘤、肝脏、脾脏、肾脏及腺胃乳头送检，共送检23份样。
2.2细菌分离培养
将病料分别接种在普通琼脂平板培养基上、麦康凯平板培养基上，37℃培养24h后观察。
2.3分子生物学鉴定
2.3.1PCR引物
根据GenBank中的J亚群禽白血病病毒env基因序列设计1对引物，上游引物AVL-15’-AAGGCTTGACTGAGGGGACC-3’，下游引物AVL-25’ -TGTGGTGGGAGGTAAAATGGC-3’，由上海捷瑞生物工程有限公司合成。
2.3.2主要试剂
GoldView I 型核酸染色剂、2×Taq PCR Master Mix（0.05U/滋L）、DL2000等均为天根生化科技（北京）有限公司产品；苯酚、氯仿、无水乙醇等为国产试剂。动物组织基因组DNA提取试剂盒（Universal Genomic DNA Extraction Kit）为宝生物工程（大连）有限公司产品。
2.3.3DNA的提取
病死鸡的血管瘤、肝脏、脾脏、肾脏及腺胃乳头的组织DNA，按动物组织基因组DNA提取试剂盒使用说明提取。
2.3.4PCR反应
反应体系50滋L：2×Taq PCR MasterMix 25滋L，上、下游引物各2滋L，DNA模板2滋L，用双蒸水补足至50滋L。
反应条件：95℃预变性5min；94℃变性40s，52℃退火1min，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。PCR产物于4℃保存。
产物检测：取6滋L扩增产物加到10g/L的琼脂糖凝胶中，电压为90V，电流为40～60mA，电泳25min左右，然后在凝胶成像仪下观察。
2.3.5核苷酸序列测定
将PCR扩增产物送宝生物工程（大连）有限公司进行核苷酸序列测定。
3、实验结果
3.1细菌分离培养结果
普通琼脂平板培养基及麦康凯平板培养基上均未生长出细菌菌落，排除细菌感染的可能。
3.2分子生物学鉴定
采用引物对23份病料组织进行了PCR扩增，结果在8份病料组织中扩增出目标基因片段，将基因片段进行测序后，经比对，确定该病原为亚群禽白血病病毒。
4、讨论与小结
（1）根据上述病、死鸡的发病情况、临床症状和分子生物学鉴定结果，判定病料中的病原为禽白血病病毒，该养殖户饲养的白羽蛋鸡发生的是禽白血病。
（2）禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leukosis Virus，ALV）引起的多种肿瘤性疾病的总称，其病原为反转录病毒，主要以造血细胞恶性增生为特征。近年来，该病的发生和流行对我国养禽业的危害一直备受关注，从长远防控而言，ALV的育种净化是最为有效的防控措施之一。
（3）ALV是以垂直传播为主的肿瘤性疾病，各饲养场在生产过程中，应注意从洁净物引种，同时加强鸡群的饲养管理与饲料营养水平，提高鸡群的自身抗病及抗应激能力，以减少该病的发生。
作者：王璇 吴玙彤 潘淑惠 徐景峨 文正常（贵州省农业科学院畜牧兽医研究所，贵阳550005）王璇吴玙彤潘淑惠徐景峨文正常（贵州省农业科学院畜牧兽医研究所，贵阳550005）
责任编辑：曹伟胜
