蛋鸡感染禽白血病的诊断

贵州某蛋鸡场发生1起以皮肤血管瘤、产蛋率下降为主要临床病理特征的疫病,根据病原的分离与鉴定,确诊此次疫病为禽白血病病毒感染所致。

2018年9月,在贵州省某养殖户饲养的蛋鸡中,有126羽蛋鸡患病,笔者从采集的患鸡病料中未分离培养出致病性细菌,将病料直接进行分子生物学鉴定,确诊为禽白血病病毒感染。现报告如下。

1、发病情况及临床症状

贵州省某养殖户饲养有195日龄的白羽蛋鸡1200羽,先后有126羽蛋鸡发病,死亡89羽,发病率10.5%,死亡率70.6%。临床症状以皮肤血管瘤、产蛋率下降为主要特征,部分鸡的鸡冠萎缩,头部、背部、胸部、腿部及翅膀可见1.2~2.5cm的血疱,褐紫色,质地柔软有一定的弹性,与周围皮肤界限清楚,血疱破裂后流血不止,血疱周边的羽毛被大片血迹污染。将病死鸡剖解可见部分发病蛋鸡的肝、脾和肾肿大,腺胃乳头肿胀。

2、实验室诊断

2.1病料采集

无菌操作采集病死鸡的血管瘤、肝脏、脾脏、肾脏及腺胃乳头送检,共送检23份样。

2.2细菌分离培养

将病料分别接种在普通琼脂平板培养基上、麦康凯平板培养基上,37℃培养24h后观察。

2.3分子生物学鉴定

2.3.1PCR引物

根据GenBank中的J亚群禽白血病病毒env基因序列设计1对引物,上游引物AVL-15’-AAGGCTTGACTGAGGGGACC-3’,下游引物AVL-25’ -TGTGGTGGGAGGTAAAATGGC-3’,由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

2.3.2主要试剂

GoldView I 型核酸染色剂、2×Taq PCR Master Mix(0.05U/滋L)、DL2000等均为天根生化科技(北京)有限公司产品;苯酚、氯仿、无水乙醇等为国产试剂。动物组织基因组DNA提取试剂盒(Universal Genomic DNA Extraction Kit)为宝生物工程(大连)有限公司产品。

2.3.3DNA的提取

病死鸡的血管瘤、肝脏、脾脏、肾脏及腺胃乳头的组织DNA,按动物组织基因组DNA提取试剂盒使用说明提取。

2.3.4PCR反应

反应体系50滋L:2×Taq PCR MasterMix 25滋L,上、下游引物各2滋L,DNA模板2滋L,用双蒸水补足至50滋L。

反应条件:95℃预变性5min;94℃变性40s,52℃退火1min,72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸10min。PCR产物于4℃保存。

产物检测:取6滋L扩增产物加到10g/L的琼脂糖凝胶中,电压为90V,电流为40~60mA,电泳25min左右,然后在凝胶成像仪下观察。

2.3.5核苷酸序列测定

将PCR扩增产物送宝生物工程(大连)有限公司进行核苷酸序列测定。

3、实验结果

3.1细菌分离培养结果

普通琼脂平板培养基及麦康凯平板培养基上均未生长出细菌菌落,排除细菌感染的可能。

3.2分子生物学鉴定

采用引物对23份病料组织进行了PCR扩增,结果在8份病料组织中扩增出目标基因片段,将基因片段进行测序后,经比对,确定该病原为亚群禽白血病病毒。

4、讨论与小结

(1)根据上述病、死鸡的发病情况、临床症状和分子生物学鉴定结果,判定病料中的病原为禽白血病病毒,该养殖户饲养的白羽蛋鸡发生的是禽白血病。

(2)禽白血病是由禽白血病病毒(Avian leukosis Virus,ALV)引起的多种肿瘤性疾病的总称,其病原为反转录病毒,主要以造血细胞恶性增生为特征。近年来,该病的发生和流行对我国养禽业的危害一直备受关注,从长远防控而言,ALV的育种净化是最为有效的防控措施之一。

(3)ALV是以垂直传播为主的肿瘤性疾病,各饲养场在生产过程中,应注意从洁净物引种,同时加强鸡群的饲养管理与饲料营养水平,提高鸡群的自身抗病及抗应激能力,以减少该病的发生。

作者:王璇 吴玙彤 潘淑惠 徐景峨 文正常(贵州省农业科学院畜牧兽医研究所,贵阳550005)王璇吴玙彤潘淑惠徐景峨文正常(贵州省农业科学院畜牧兽医研究所,贵阳550005)

责任编辑:曹伟胜

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