鸡免疫疫苗后H7N9亚型流感病毒抗体消长规律研究

为了解鸡免疫重组禽流感(H5+H7)二价疫苗后,H7 亚型禽流感病毒(Re-1 株)抗体的消长规律,在一个蛋鸡场进行临床免疫试验。实验鸡群在 181 天龄开始首免重组禽流感(H5+H7)二价疫苗,分别在 181d、188d、195d、202d、209d 和 256d 采集血清进行 H7N9 亚型流感病毒抗体检测,结果为,鸡群在 181d、188d、195d、202d、209d 和256d 的抗体滴度中位数分别为 0.74log2 、3.30log2 、7.74log2 、5.37log2 、8.52log2 和 8.93log2 。结果表明,鸡群免疫重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗后,能够诱导产生 H7N9 亚型流感抗体, 一免后 14d,抗体滴度达到较高水平,随后抗体滴度开始下降,二次免疫后抗体滴度持续上升,在二免后 54d 还能维持较高的抗体滴度,抗体阳性达到88.89%。

禽流感(Avian influenza,AI)是由禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的禽类高度接触性、急性传染病,禽流感病毒属于正黏病毒科流感病毒属 A 型禽流感病毒 [1] 。禽流感病毒有很多亚型,其中认为H5 和 H7 亚型多为高致病性强毒株 [2] 。2013 年 3 月,首先在华东地区发现了 3 例人感染 H7N9 流感病例 [3] ,随后向全国各地扩散,造成了人的死亡,给公共卫生造成了较大的威胁,对家禽养殖业形成了很大冲击。自从 H7N9 亚型流感发现以来,对家禽的临床症状主要表现为低致病性,但在 2017 年 1 月农业部门在活禽交易市场发现了具有高致病性分子特征 H7N9 亚型流感病毒,随后在全国各地有零星疫情发生 [4] 。H7N9 亚型流感病毒发生变异,从对家禽的低致病性变异为对家禽尤其是鸡的高致病性, 目前已报道发生的高致病性 H7N9 亚型流感疫情的家禽养殖场几乎都是鸡场。为了遏制 H7N9 亚型流感疫情,2017 年 7月开始,农业部率先在广东和广西两地开展重组禽流感(H5+H7)二价疫苗免疫试点,此次为 H7 亚型禽流感疫苗的初次免疫。为掌握鸡免疫重组禽流感(H5+H7)二价疫苗后,H7N9 亚型禽流感病毒抗体的消长规律,在东莞市选取了一个蛋鸡场进行临床试验,现将试验情况报告如下。

1、材料与方法

1.1 实验动物

在东莞市某蛋鸡场,随机选取 1 个批次 27只 181 天龄的蛋鸡进行试验,用脚环对每羽鸡做好标记直到试验结束,临床表现健康,分别在181d、202d 免疫重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗 0.5mL,为哈尔滨维科生物技术开发公司产品,批号 20180603。

1.2 样品采集

分别在蛋鸡的181d、188d、195d、202d、209d 和 256d,翅静脉采集全血,3 000 r/min 离心 10 min,分离出血清,-20℃保存,待检。

1.3 仪器设备

96 孔“V”型反应板,离心机,8 道移液器,微量震荡器等。

1.4 试剂

1.4.1 1%鸡红细胞悬液

采集实验室饲养的 3 只禽流感和新城疫非免疫的健康公鸡的血液与阿氏液等体积混合,用 pH 值 7.2 的 0.01 mol/L PBS 液洗涤 3 次,每次以 1 000 r/min 离心 10 min,洗涤后用 PBS 液配成体积分数 1%鸡红细胞悬液,4℃保存备用。

1.4.2 抗原和阳性血清

H7N9 亚型禽流感抗原(Re-1 株)和阳性血清,为中国哈尔滨维科生物科技有限公司产品,批号分别为:20170302,2016001。

1.5 方法

按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003) 的血凝与血凝抑制方法操作。以完全抑制 4 单位抗原的血清最高稀释倍数作为 HI 的滴度。HI 效价小于或等于 31og2 判阴性,HI 效价大于或等于 41og2 判阳性,判定为抗体合格。

2、结果与分析

试验的结果为,鸡群在免疫疫苗前(181 日龄)H7N9 亚型禽流感抗体滴度中位数为0.74log 2 ,只有 1 份血清抗体阳性;在 188 日龄,抗体滴度中位数为3.30log2 ,抗体阳性率33.33%;在 195 日龄,抗体滴度中位数为7.74log2 ,抗体阳性率为 88.89%;在 202 日龄,抗体滴度中位数为 5.37log2 ,抗体阳性率为85.19%;在 209 日龄,抗体滴度中位数为8.52log2 ,抗体阳性率为 100%;在 256 日龄,抗体滴度中位数为 8.93log2 ,抗体阳性率为88.89%,详细结果见表 1,

结果表明,鸡群免疫重组禽流感病毒(H5+H7) 二价灭活疫苗后,能够诱导产生H7N9 亚型流感抗体,一免后 14d,抗体滴度达到较高水平,随后抗体滴度开始下降,二次免疫后抗体滴度持续上升,在二免后 54d 还能维持较高的抗体滴度,抗体阳性达到 88.89%,鸡群免疫疫苗后 H7N9 亚型流感抗体消长趋势见图 1。

3、讨论

(1)根据试验研究结果,采用重组禽流感(H5+H7)二价疫苗对鸡群进行免疫后,通过分析免疫抗体的滴度表明,重组禽流感(H5+H7)二价疫苗能诱导产生较高免疫抗体,表现出良好的免疫原性和免疫效果。一次免疫后在 14d达到高峰,随后抗体水平开始下降,在一免后21d 进行二次免疫比较理想,二次免疫后抗体持续上升,并维持较长时间,二次免疫后 54d,抗体阳性率达到 88.89%,表明二价疫苗的免疫程序合理有效。养殖场免疫疫苗后,要对免疫的抗体水平进行跟踪监测,并确保及时进行二次免疫。

(2)防控高致病性禽流感,疫苗免疫是较有效的措施,在防控 H5 亚型高致病性禽流感中,疫苗起到较大作用。为了应对高致病 H7N9 亚型流感,农业部及时推出(H5+H7)二价疫苗,根据试验结果,疫苗的效果比较理想,对防控H7N9 亚型流感将起到较大的作用。目前, 重组禽流感(H5+H7)二价疫苗已列入强制免疫计划的项目,但是,种禽场刚开始开展二价疫苗的免疫,种禽生产出具有高母源抗体的种卵还需要一段时间 [5] ,刚出生的雏鸡在无母源抗体或低抗体滴度的情况下,无法有效抵御野毒的侵袭,所以,种禽场要加强疫苗的免疫,做好生物安全隔离、消毒等措施。

(3)在实验室的试验结果,4log 2 的抗体滴度可以抵御强毒的攻击,但在复杂的养殖环境下,禽群应保持更高的抗体滴度才能抵御野毒的侵袭 [6] 。养殖场使用重组禽流感(H5+H7)二价疫苗可以减少免疫次数,降低成本,但是,2 种不同亚型的母源抗体水平不一致,首次免疫的日龄至关重要,所以,还需要对免疫程序进一步试验研究。

参考文献

[1] Y.M.Saif,H.J.Barnes,J.R.Glisson 等. 禽病学(第 11 版)[M]. 北京: 中国农业出版社,2005:147-166.

[2] 张进. 高致病性禽流感免疫程序的优化及应用[D].湖南:湖南农业大学,2010.

[3]黄珍霞,廖晓东.H7N9 亚型禽流感综合防控技术现状分析与对策研究[J].中国卫生事业管理,2013, (12):949-952.

[4]贾伟新,廖明.当前我国 H5、H7 亚型禽流感流行现状及防控建议.中国家禽,2017,39(16):1-4.

[5]宋峰,李峰,李玲,等.樱桃谷肉鸭免疫重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗血清抗体监测报告[J].中国动物保健,2017,19(11):89-92.

[6]曾显营,钟功勋,李雁冰,等.禽流感病毒 H5N1变异株灭活疫苗(Re-4 株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究 [J]. 中国预防兽医学报,2010,32(10):800-803.1

作者:潘杰1,陈松春2,张险朋1* ,莫钻兰 1 ,黄育浩1(1.广东省东莞市动物疫病预防控制中心,广东东莞 523086;2.广东省东莞市常平镇农业技术服务中 心 , 广东东莞523070)

作者简介: 第一作者: 潘杰(1980-),男,广东韶关人,兽医师,从事动物防疫工作 邮箱: 751564369@qq.com

* 通讯作者:张险朋(1979-),男,广东五华人,高级兽医师,从事动 物疫病防控和兽医实验室检测工作 邮箱:xian.peng@163.com

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