1株鸽Ⅵ型新城疫病毒的分离与鉴定

2017 年 6 月在广东 某鸽场分离到 1 株鸽Ⅵ型新城疫病毒,不同日龄鸽接种该病毒后可有明显新城疫病毒感染症状和病理变化。动物回归试验发现攻毒鸽出现明显的翅膀下垂,脚部麻痹,站立不稳、倒地不起等神经症状,剖检发现肺脏、气管、脾脏和腺胃有明显出血。

新城疫病毒 NDV 主要引起鸡、鹅和鸭等发生新城疫,但近年来的研究发现新城疫病毒感染并致病的宿主范围有扩大的趋势[1]。鸽新城疫,俗称鸽瘟,由基因型Ⅵ新城疫病毒引起,是引起新城疫第 3 次大流行的主要原因,欧洲大部分地区、北美、加拿大、乌干达、南非、以色列、苏丹、埃及、印度、日本和中国香港养禽业都因此遭受到重大的损失[2]。其中宿主包括野生鸽和家鸽,而鸽被认为是商业禽类潜在的 NDV 感染源[3]。据报道,使用被病鸽污染的饲料可以导致非免疫鸡群暴发新城疫[4],表明对鸽子进行持续 NDV 病原学与流行病学监测具有重要的意义。

1、材料与方法

1.1试验鸽及鸡胚

9 日龄 SPF 鸡胚由广东大华农有限公司提供。鸽由某鸽场提供,试验动物新城疫抗体阴性,饲养于华南农业大学兽医学院动物生物安全三级实验室(ABSL-3)。

1.2病毒分离

2017 年 6 月广东某鸽场鸽群出现死亡,剖检发现肺脏、脾脏和腺胃有明显出血。取病鸽肺脏、肾脏、脾脏及腺胃无菌研磨成匀浆,使用试剂盒提取RNA,利用检测新城疫病毒的特异性引物进行 PCR 检测,1%的琼脂糖凝胶电泳观察实验结果。再将阳性脏器研磨成匀浆,加入 10 000 IU/mL 的双抗 PBS,反复冻融 3 次后,接种9 日龄 SPF 鸡胚,于 37℃培养箱中孵育 72 h 后收取尿囊液。用 1%鸡红细胞做 HA 检测,检测结果为阳性,将分离的病毒放入-80℃保存。

1.3 动物试验测定病毒的

EID50 后,将病毒稀释成 106EID50 保存。1周龄鸽和 3 周龄鸽各 15 只,每组有 12 只感染组和 3 只同居组。感染组接种病毒 0.2 mL/只,同居组接种相同剂量的PBS,感染后观察动物的发病和死亡情况,感染第 3 天剖检发病鸽,观察脏器病变情况。

2、试验结果

2.1 测序结果

PCR 检测和测序结果都表明致病病原为鸽Ⅵ型新城疫病毒,图 1 为新城疫 F 基因的PCR 鉴定结果。利用鸡胚测得该病毒的 EID50 为 107.81

2.2 动物试验

周龄鸽感染该病毒后,在 4 DPI 出现死亡和发病,表现为双脚麻痹,站立困难,严重发展为倒地不起(图 2),死亡率较高,10 DPI 内感染组和同居组死亡均为 100%。3 周龄鸽在 6 DPI 出现翅膀下垂,羽毛蓬乱,倒地不起,双脚朝上颤抖等症状(图 3),10 DPI 开始发生死亡,死亡率为 30%,低于 1周龄鸽。

剖检发现病鸽肺脏、气管和腺胃有明显出血斑(图 4、5、6)。

3、讨论

某鸽场鸽发生死亡,经临床诊断和病毒分离鉴定,为鸽感染Ⅵ型新城疫病毒,发病时可使鸽发生翅膀僵硬下垂,腿部无力,脚部蜷缩等神经症状,随后导致食欲不振,倒地不起。

目前,防制鸽新城疫主要依靠疫苗的免疫接种达到预防效果。虽然鸽新城疫和鸡新城疫存在着较高的交叉反应,但在实际应用中用鸡新城疫疫苗免疫鸽子来防制鸽新城疫的效果并不理想。越来越多的研究表明,用与鸽新城疫基因型相同的病毒制备的灭活疫苗能够提供更加坚强而持久的免疫效果。

此外,加强鸽场的饲养管理工作是重中之重,勤打扫、勤消毒和做好检疫等各项生物安全措施是必要条件。在引进新鸽种时要严格执行隔离饲养制度。在鸽场已发生疫情时,应尽早发现,尽快隔离,及时处理病死鸽,将鸽场重新打扫消毒,对假定健康鸽进行紧急接种。只有在鸽饲养环境洁净的条件下,才能保证鸽的健康成长。

参考文献

[1]丁卫星,王荣谈,孙明昌,等. 鸡新城疫疫苗预防鸽Ⅰ型副黏病毒病的免疫研究[J].上海农业学报,2014,30( 1) : 72-74.

[2]李仕超.鸽源新城疫病毒的遗传进化分析及其免疫原性研究[D].北京: 中国农业科学院, 2015.

[3]Alexander,D.J..Newcastle disease in the European Union 2000-2009.Avian Pathol., 2011, 40 (6), 547-558.

[4]Alexander, D.J., Parsons, G., Marshall, R., 1984. Infection of fowls with Newcastledisease virus by food contaminated with pigeon faeces. Vet. Rec. 115 (23), 601-602.

作者: 张一帆,谢鹏,林秋燕,向斌,廖明,徐成刚 * , 任涛 * (华南农业大学兽医学院,广州 510640)

* 为通讯作者

责任编辑:曹伟胜

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