鸡免疫重组禽流感(H5+H7)二价灭活疫苗效果评价

为了掌握重组禽流感(H5+H7)二价灭活疫苗在鸡中的免疫效果,分别在东莞选取5 个规模养殖场和 14 个镇(街)散养鸡免疫疫苗 21 天后,采集血清样品进行 H5 亚型和H7N9 亚型禽流感病毒抗体检测,结果为 H5 亚型禽流感病毒(Re-8 株)抗体阳性率为 79.23%(683/862),H7N9 亚型禽流感病毒抗体阳性率为 64.15%(553/862)。结果表明,该疫苗在鸡群中能够产生比较好的应答,H5 亚型禽流感病毒(Re-8 株)抗体阳性率均能达到免疫规范要求的 70%以上。H7N9 亚型禽流感病毒抗体阳性率,在种鸡场和肉鸡场能到 70%以上,但散养鸡抗体阳性率较低,有不能抵御野毒侵袭的风险,还需要进行二次免疫。

禽流感是由禽流感病毒 (avian influenzavirus,AIV)引起的高度接触性传染病 [1] 。H5 和H7 亚型的某些毒株可以造成禽类很高的发病率和死亡率,被称为高致病性禽流感病毒(HPAIV)[2] 。目前,已有禽流感病毒 H5N1、H5N2、H5N6、H9N2、H7N7、H10N7 和 H10N8 等感染人的报道 [3] 。其中,H7N9 亚型流感是 A 型流感中的一种,2013 年 3 月 31 日首先在中国上海和安徽发现了 3 例人感染 H7N9 流感病例[4],此后该病迅速在中国大陆及港澳台地区蔓延,并呈现季节性流行趋势。2016 年年底,廖明等首次分离到 H7N9 亚型流感的变异株,变异株在家禽中表现为高致病性[5] 。为了遏制H7N9 流感疫情,农业部决定从 2017 年 7 月开始,在广东、广西两省(区)进行重组禽流感(H5+H7)二价灭活疫苗免疫试点。为掌握该疫苗对鸡的免疫效果,分别在东莞选取 5 个规模养殖场和 14 个镇(街)散养鸡,免疫重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗后 21 天进行监测,现将结果报告如下。

1、材料与方法

1.1 样品采集

共采集鸡血清 862 份,其中鸡血清 258 份分别采自东莞市 2 个种鸡养殖场、2 个肉鸡养殖场;散养鸡血清 604 份,采自东莞市 14 个镇(街)散养鸡。免疫重组禽流感(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8 株 +H7N9 H7-Re1 株,批号为 20180603) 21 天后,以翅静脉采血 2 mL,以3 500 r/min 离心 15 min 分离获得待检血清,-20℃保存,备检。

1.2 试剂与方法

1.2.1 1%鸡红细胞悬液

采集实验室饲养的 3 只禽流感和新城疫非免疫的健康公鸡的血液与阿氏液等体积混合,用 pH 值 7.2 的 0.01 mol/L PBS 液洗涤 3 次,每次以 1 000 r/min 离心 10 min,洗涤后用 PBS 液配成体积分数 1%鸡红细胞悬液,4℃保存备用。

1.2.2 禽流感抗原和阳性血清

H5 亚型禽流感抗原(Re-8)株和阳性血清、H7N9 亚型禽流感抗原株和阳性血清,为哈尔滨维科生物科技有限公司产品。

1.2.3 主要耗材和仪器

96 孔“V”型反应板、离心机、八道移液器、微量震荡器。

1.2.4 方法

按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)规定的血凝与血凝抑制方法操作。以完全抑制 4 单位抗原的血清最高稀释倍数作为 HI 的滴度。HI 效价小于或等于 31og2判阴性,HI 效价大于或等于 41og2 判阳性,判定为抗体合格。

2、结果与分析

2.1 H5 亚型禽流感病毒抗体检测结果

共检测鸡血清 862 份,H5 亚型禽流感病毒(Re-8 株) 抗体阳性 683 份,抗体阳性率79.23%,其中种鸡场抗体阳性率最高,其次为肉鸡场,散养鸡最低,详细结果见表 1。

2.2 H7N9 亚型禽流感病毒抗体检测结果

共检测鸡血清 862 份,H7N9 亚型禽流感病毒抗体阳性 553 份,抗体阳性率 64.15%,其中种鸡场抗体阳性率最高,其次为肉鸡场,散养鸡最低,详细结果见表 2。

3、讨论

3.1 禽流感疫苗对于我国禽流感的防控起着至关重要的作用,为了遏制 H7N9 亚型禽流感在家禽中流行,2017 年 7 月,农业部率先在广东和广西两省(区)试点免疫。根据此次免疫疫苗后的监测结果,二价疫苗在鸡群中能够产生比较好的免疫应答,种鸡场、肉鸡场和散养鸡免疫二价疫苗后,H5 亚型禽流感病毒(Re-8 株)抗体水平较高,均能达到农业部免疫规范要求的 70%以上。H7N9 亚型流感病毒免疫抗体水平稍差一点,种鸡场和肉鸡场能达农业部免疫规范要求的 70%以上,但散养鸡的免疫合格率只有 55.79%,达不到要求,还需要进行二次免疫。

3.2 此次免疫效果的评价是选取了 2 个种鸡场、2 个肉鸡场和 14 个镇(街)的散养鸡,每批抽样采血的都是随机抽取的,不排除存在鸡个体差异及其他因素在实验过程中造成的误差,因此实验数据都只是实验评估数据,但本法是基层工作中常用的免疫评估方法,通过本次实验可以得出,此种免疫评估方法在基层实际工作中具有一定的科学性和可行性,能够满足基层免疫效果评价的要求。

3.3 造成疫苗免疫失败因素有较多,包括免疫的程序、动物品种的差异、家禽中免疫抑制疾病的存在、动物营养状况、接种疫苗的应激、疫苗的质量、疫苗接种的方式、疫苗接种的剂量、疫苗的冷链配送和免疫接种前后使用了免疫抑制性药物等。

3.4 种鸡场和肉鸡场为规模场,免疫程序比较规范,根据了解,在免疫二价疫苗以前已经进行H5 亚型禽流感疫苗的免疫。散养鸡一般来自三鸟批发市场或者农贸市场,溯源跟踪一般都是来自外市的大型家禽规模养殖场,在出栏前已有一定的 H5 亚型禽流感疫苗免疫基础,在购买回来育肥后免疫 1 次,H5 亚型禽流感病毒抗体基本上可以达到合格水平。散养鸡在养殖场饲养时仍未开展 H7N9 亚型流感疫苗的免疫,进入市场流通环节和散养阶段时,从饲养环境、免疫规范、个体机能等方面未达到规模化养殖的标准,仅免疫 1 次未能产生良好的被动免疫效果,也与该疫苗属于灭活苗有关,灭活疫苗通常要经过 2 次以上免疫才能诱导机体形成较好的免疫应答机制,所以散养鸡 H7N9 亚型流感病毒抗体水平较低。

参考文献

[1] Y.M.Saif,H.J.Barnes,J.R.Glisson 等. 禽病学[M]. 第 11 版. 北京: 中国农业出版社,2005:147-166.

[2]张毅,王幼明,王芳,等.我国禽流感研究进展及成就[J].微生物学通报,2014,41(3):497-503.

[3]黄珍霞,廖晓东.H7N9 亚型禽流感综合防控技术现状分析与对策研究[J].中国卫生事业管理,2013, (12):949-952.

[4]Gao R,Cao B, Hu Y, et al. Human infection with a novel avian-origin influenza A (H7N9) virus[J].N Engl J Med,2013,368(20):1888-1897.

[5]李冰.茂名市家禽 H7N9 流行现状及防控对策[J].广东畜牧兽医科技,2017,42(5):17-19.

作者:周柱辉1,陈松春2,潘杰3,黄兴荣1,王自强3,张险朋3*(1 广东省东莞市横沥镇农业技术服务中心,广东东莞 523460;2 广东省东莞市常平镇农业技术服务中心,广东东莞 523070;3 广东省东莞市动物疫病预防控制中心,广东东莞 523086)

第一作者:周柱辉(1970-),男,广东东莞人,兽医师,从事动物疫病防控工作
通讯作者:张险朋(1979-),男,广东五华人,高级兽医师,从事动物疫病和人畜共患病防控工作邮箱:xian.peng@163.com

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