鸡禽流感和新城疫双针免疫试验

本试验旨在对同时接种禽流感灭活苗和鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的鸡群免疫效果进行评价。结果表明,禽流感灭活苗和新城疫同时接种雏鸡,其中新城疫使用新城疫Ⅳ系苗首免,用新城疫油乳剂灭活苗二免后,可产生高水平的抗体,且抗体维持时间长,能较好地抵抗病毒的攻击。接种雏鸡后,可使原有抗体水平相差悬殊的鸡群产生高效价、较为整齐的抗体,免疫 6 个月后,HI 抗体仍在6log 2 以上。

在国际动物卫生法典中,禽流感和高致病性禽流感同属法定报告动物疫病 [1] 。目前高致病性禽流感和新城疫在我国仍是危害养鸡业的主要传染病,加上市场流通日益活跃,给养鸡业带来了严峻的考验。为了减少防疫人员的工作量,提高工作效率,减少由于疫苗免疫带来的应激,选择合适的疫苗,采取合理的免疫程序以促使这2 种疾病的免疫抗体水平能够长时间维持在较高的水平显得尤为重要。实际生产中常使用的新城疫Ⅰ系疫苗(国家现已禁用)毒力较强,对雏鸡有一定的致病性,且该苗不能用于产蛋鸡,可引起产蛋量大幅下降。新城疫 CS 株疫苗,免疫效果与新城疫Ⅰ系苗相似,但不能用于初生雏鸡和产蛋鸡。新城疫Ⅳ系疫苗(Lasota 株)毒力低,可在雏鸡、青年鸡和产蛋鸡上使用,但维持的时间较短 [2] 。新城疫油乳剂灭活苗可用于雏鸡预防新城疫,且不受母源抗体的干扰,能长时间维持较高抗体水平,使产蛋鸡安全地度过整个产蛋期,抵抗新城疫强毒的侵袭 [3] ,但价格昂贵。为获得上述两病的免疫效果,同时减少基层防疫人员的工作量,本实验将禽流感灭活苗和新城疫疫苗同时双针接种雏鸡,新城疫使用新城疫Ⅳ系苗首免,用新城疫油乳剂灭活疫苗二免,以了解新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感灭活疫苗同时免疫的效果。结果显示,试验中采取的免疫程序能使 2 种疾病的免疫抗体均能长时间维持在较高的水平,可以此来制定出符合本地散养鸡的免疫程序。

1、试验材料和方法

1.1 试验疫苗

重组禽流感 H5 亚型三价灭活疫苗(Re-6 株 +Re-7 株 +Re-8株):郑州乾元浩股份有限公司生产,批号 2016067;新城疫Ⅳ系疫苗(LaSota 株):广西丽源生产,批号 20160424;新城疫油乳剂灭活疫苗:扬州威克生产,批号 1604039。

疫苗按使用说明书要求的条件进行保存、运输和使用。

1.2 试验鸡的选择

随机选择本市新集镇 4 群相似日龄农户捉养的雏鸡,分为 A、B、C 和 D 组。

1.3 主要试验仪器和检测抗原

采血器、微量加样器、振荡器、96 孔 V 型一次性反应板;禽流感抗原 H5 亚型 RE-6 株(2016008)、H5 亚型 RE-7 株(2016017)、H5 亚型 RE-8 株(2016006),哈尔滨维科生产;禽流感 H5 亚型 RE-6 株 HI 试验阳性血清(2016002)、禽流感 H5 亚型 RE-7 株 HI 试验阳性血清(2016001)、禽流感 H5 亚型 RE-8 株 HI试验阳性血清(2016005),哈尔滨维科生产;禽流感 H5 亚型阴性血清(2017001),哈尔滨维科生产;鸡新城疫血凝抑制抗原(20160401)、新城疫阳性血清 (20160904)和新城疫阴性血清(20160701),均由青岛易邦生物工程有限公司生产。

1.4 免疫试验设计

A、B、C 和 D 组的鸡分别于 15 日龄采集血样,用血凝抑制(HI)试验检测鸡的禽流感和新城疫母源抗体,结果在 0~2log2 之间。A、B、C 组在 36 日龄左右进行禽流感和鸡新城疫Ⅳ系疫苗(LaSota 株)双针免疫,剂量为禽流感灭活疫苗 0.5 mL/ 羽肌肉注射,鸡新城Ⅳ系疫苗(LaSo-ta 株)2 羽份 / 羽滴鼻;间隔 3~4 周天后再进行禽流感和鸡新城疫油乳剂灭活疫苗双针免疫,剂量为禽流感灭活疫苗 1 mL/ 羽肌肉注射,鸡新城疫油乳剂灭活疫苗 1 mL/ 羽肌肉注射。D组仅使用禽流感和鸡新城疫油乳剂灭活疫苗免疫双针免疫 1 次,剂量为禽流感灭活疫苗0.5mL/ 羽肌肉注射,鸡新城疫油乳剂灭活疫苗0.5 mL/ 羽肌肉注射。具体分组和免疫情况见表1。

1.4.1 免疫接种试验

在首次接种后的第 1 个月、2 个月、3 个月、4 个月、5 个月和 6 个月分别采集血液,用 HI 试验检测其免疫抗体效价。每次采集的血样及时分离血清,保存在冰柜 -20℃冷冻待检。

1.4.2 免疫反应临床观察

在接种疫苗后注意观察鸡的临床状态,并做记录。

2 试验结果与分析

A、B、C 组雏鸡在 36 日龄左右同时进行禽流感和鸡新城疫Ⅳ系苗首免,在首免 3~4 周后同时进行禽流感灭活苗和新城疫油乳剂灭活苗二免;D 组雏鸡仅在 51 日龄同时进行一次禽流感灭活苗和新城疫油乳剂灭活苗免疫。首免后在 30 天、60 天、90 天、120 天和 180 天分别采集血液,分别检测禽流感和新城疫的血凝抑制价。

2.1 血样禽流感血凝抑制价

免疫 30 天时,A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%,抗体滴度都在 7 log2 以上,D组血样的禽流感免疫合格率为 100%,抗体滴度都在 7 log2 以上;免疫 60 天,A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%,且 70%的血样抗体滴度在 10 log2 ,D 组血样的禽流感免疫合格率为 100%,且 30%的血样抗体滴度在 10 log2 ;免疫 90 天时,A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%,D 组血样的禽流感免疫合格率为100%;免疫 120 天时,A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%,抗体滴度在 6 log2 以上,D 组血样的禽流感免疫合格率为 100%,D组血样的抗体滴度在 4~6 log2 ;免疫 150 天时,A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%,且抗体滴度仍然在 6 log2 以上,D 组血样的禽流感免疫合格率为 40%,此时已缺乏足够的保护力;免疫 180 天时,A、B、C 3 组血样的禽流感免疫合格率为 100%,且抗体滴度在 4~6 log2 ,D组血样的禽流感免疫保护率为小于 40%。结果如表 2。试验结果显示:禽流感灭活苗免疫在仅免疫 1 次,剂量 0.5 mL/ 羽时,能提供有效的免疫保护达 4 个月,需要在第 5 个月加强免疫。分析其原因,可能是由于油乳剂灭活疫苗的黏滞性,实际接种剂量 0.5 mL/ 羽时,有效剂量达不到要求,所以实际防疫过程中建议剂量视情况略增至 0.7~1 mL / 羽,可提供至少 6 个月的有效免疫保护,达到预期效果。

2.2 血样新城疫血凝抑制价

免疫 30 天时,A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 0、100%、20%,D 组血样的新城疫免疫合格率为 90%;免疫 60 天,A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 100%,且血样抗体滴度均为 10 log2 ,D 组血样的新城疫免疫合格率为 100%,且血样抗体滴度在 6 log2 以上;免疫90 天时,A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 100%,D 组血样的新城疫免疫合格率为100%;免疫 120 天时,A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 100%,抗体滴度仍然在 7 log2以上,D 组血样的新城疫免疫合格率为 100%,D 组血样的抗体滴度在 4~6 log2 ;免疫 150 天时,A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为100%,且抗体滴度仍然在 7 log2 以上,D 组血样的新城疫免疫合格率为 80%;免疫 180 天时,A、B、C 3 组血样的新城疫免疫合格率为 100%,且抗体滴度在 6 log2 以上,D 组血样的新城疫免疫保护率为 60%。结果如表 2。试验结果显示:新城疫的免疫仅适用新城疫灭活疫苗免疫 1次,剂量为 0.5 mL/ 羽,可提供有效的免疫保护达 5 个月;在使用新城疫Ⅳ系疫苗(LaSota 株)首免,剂量 2 羽份 / 羽,使用新城疫油乳剂灭活疫苗二免,剂量为 1 mL/ 羽,可提供有效的免疫保护至少达 6 个月。

根据以上试验结果,在秋季散养户集中防疫时对雏鸡实施禽流感免疫时,选择首免剂量为 0.5 mL/ 羽,同时进行新城疫Ⅳ系疫苗(LaSo-ta 株)首免,剂量为 2 羽份 / 羽,3~4 周后进行禽流感二免,剂量为 1 mL/ 羽;同时使用新城疫油乳剂灭活疫苗二免,剂量为 1 mL/ 羽。成年鸡实施禽流感免疫首免剂量为 1 mL/ 羽,同时进行新城疫油乳剂灭活疫苗免疫 0.7 mL/ 羽。在免疫 21 天后,进行免疫抗体监测,结果均能达到符合农业部要求的禽群抗体合格率。对于商品蛋鸡实施 14 日龄首次免疫禽流感灭活疫苗加新城疫油乳剂灭活疫苗 0.5 mL/ 羽,间隔 3~4周后再用禽流感灭活疫苗加新城疫油乳剂灭活苗进行二免,剂量 1 mL/ 羽,110 日龄用禽流感灭活疫苗加新城疫油乳剂灭活疫苗进行加强免,剂量 1 mL/ 羽,可为产蛋期提供有效的抗体保护。

通过这样的免疫程序,既能减少防疫员对面广量大散养家禽的防疫工作量,又可达到散养鸡的禽流感和新城疫的免疫效果,还能减少因免疫接种带来的禽群的应激反应等问题,提高了养殖者的经济效益,达到了事半功倍的效果。

参考文献

[1] 甘孟侯.中国禽病学[M].北京:中国农业出版社,1999.

[2] 杨增岐,赵余放,王云峰,等.鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的免疫效力试验[J].中国畜禽传染病,1997,(06).

[3] 秦卓明,徐怀英,刘玉山,等.疫苗免疫压力下新城疫病毒的动态演化 [J]. 中国兽药杂志,2013,47(2):1-6.

[4] 姚春峰,刘文博,刘秀梵,等.新城疫病毒分离株的生物学特性鉴定及 F 蛋白基因序列分析[J].病毒学报,2009,25(2):117-124.

作者:许静1周歌1邵向群1曹志全1彭园1糜晓霞1钱海燕2陈林佳2陆红霞3(1.江苏省仪征市畜牧兽医站,江苏仪征211400;2.江苏省仪征市新集镇畜牧兽医站,i江苏仪征211403 3.江苏省仪征市青山镇畜牧兽医站,江苏仪征211417)

通讯作者:许静,地址:江苏省仪征市真州西路 25 号,电话:(0)13852530789,E-mail:13852530789@139.com

责任编辑:曹伟胜

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