鸡滑液支原体（Mycoplasma synoviae, MS）可引起鸡滑液囊炎，该病是鸡的一种急性或慢性传染病，以侵害关节滑液、腱鞘膜和气囊为主，其特征为关节、腱鞘和脚掌肿胀 [1] ，并使产蛋鸡产蛋量下降，蛋品质以及孵化率降低 [2] 。鸡群感染后可导致明显的跛行，生长发育迟缓及胴体降解等，并与呼吸道疾病有所关联，目前该病在鸡场中广泛流行。MS 可通过接触传播，感染的鸡接触健康鸡后，健康鸡呼吸道中能检测到MS [3] 。MS 还可以垂直传播 [4]，经卵传播给子代，子代雏鸡感染之后可慢性感染并持续终生。鸡滑液支原体感染已遍布全球 [5]，给养殖业带来了巨大的损失。因此，控制种鸡的感染以防止滑液支原体经卵传播是非常重要的。泰万菌素已广泛用于防治猪气喘病、猪痢疾、猪增生性肠炎和鸡支原体感染，本研究将不同浓度的泰万菌素作用于鸡胚中的 MS，以探索泰万菌素对鸡胚中MS 的抑制作用。
1、材料与方法
1.1 材料
（1）鸡滑液支原体 MS- HB1 株，由华中农业大学兽医微生物与免疫学教研室分离、鉴定与保存，浓度为 10 7.0 CCU/mL。
（2）泰万菌素，批号为 AW- 175，由浙江伊科拜克动物保健品有限公司提供。使用前进行溶解，并过滤除菌。
1.2 方法
1.2.1 MIC 测定
在 96 孔细胞板中每孔加 100 滋L FM-4 培养基。将 100 滋L 泰万菌素加入第 1 孔中，充分吹打均匀后，取 100 滋L 加入第 2 孔，依次 2 倍倍比稀释到第 10 孔，至泰万菌素的浓度分别为 2 滋g/mL、1 滋g/mL、0.5 滋g/mL、0.125 滋g/mL、0.0625 滋g/mL、0.031 滋g/mL、0.016 滋g/mL、0.008滋g/mL、0.004 滋g/mL 和 0.002 滋g/mL。将 100 滋L稀释到 10 5 CCU/mL 的 HB1 株菌液加到细胞板的 1～10 孔中，第 11 孔不加作阳性对照，第 12孔只加药物不加菌液作阴性对照。每个稀释度做两个重复。细胞板加盖密封，37℃温箱培养5～7 日，当阳性对照变为黄色，阴性对照不发生颜色变化时，未发生颜色变化的最低药物浓度为该抗菌药的 MIC。
1.2.2 接种
当 SPF 鸡胚孵化至 5 日龄时，经卵黄囊接种 10 4.0 CCU/0.1mL 的滑液支原体 HB1 株，0.1mL/ 枚。3 日后，经相同方式接种 10MIC 和50MIC 的泰万菌素，同时设置接毒对照 10 枚，只接种 MS 不接种泰万菌素；和空白对照 10枚，MS 和泰万菌素均不接种，各组均置于 37℃孵化箱进行孵化。
1.2.3 卵黄膜支原体检测
于泰万菌素接种后第 3 日和第 5 日，在实验组和对照组中各取一半鸡胚，分别抽取适量卵黄膜，接种于 5 mL 支原体液体培养基中，置温箱培养。7 日后，取卵黄膜培养物以 8 000r/min 离心 5 min，取上清 100μL，加入 900μL新鲜培养基，置 37℃温箱继续进行培养。
1.2.4 结果判定
7 日后，根据培养物颜色变化判定结果。
2、结果
2.1 MIC 测定结果
泰万菌素对 MS-HB1 株的 MIC 为0.008滋g/mL。
2.2 泰万菌素作用 3 日结果
在鸡胚接种泰万菌素后 3 日，在实验组和对照组中随机选择一半鸡胚，取卵黄膜进行 MS增殖实验，结果 A-0.4、A-0.08 和接毒对照组的变色数分别为 7 管（7/12）、7 管（7/10）和 10 管（10/10），表 明 0.08 滋g 泰 万 菌 素 对 鸡 胚 中MS-HB1 株的抑制率为 41.7%（5/12）；0.4滋g 泰万菌素对鸡胚中 MS-HB1 株的抑制率为 30%（3/10），结果见表 1。用卡方检验对各组数据进行比较，泰万菌素接种组与对照相比差异不显著（P＞0.05）。
2.3 泰万菌素作用 5 日结果
在鸡胚接种泰万菌素后 5 日，在实验组和对照组中随机选择一半鸡胚，取卵黄膜进行 MS增殖实验，结果 A-0.4、A-0.08 和接毒对照组的变色数分别为 3 管（3/10）、5 管（5/11）和 10 管（10/10），表明药物处理 5 日对鸡胚中 MS-HB1株的有效率分别为 70%（7/10）、54.5%（6/11）。结果见表 2。用卡方检验对各组结果进行比较，泰万菌素接种组与对照相比差异非常显著（P＜0.05）。
3、讨论
MS 可经蛋传播，故从蛋抑制传播是有效的控制方式。本研究首先测定泰万菌素对鸡滑液支原体 MS-HB1 株 的 MIC。 泰万菌素对MS-HB1 株的 MIC 为0.008μg/mL。使用 10MIC和 50MIC 的泰万菌素作用 3 日对鸡胚中 MS 的抑制率分别为 41.7%和 30%，作用 5 日对鸡胚中 MS 的抑制率为 54.5%和 70%，接毒对照组抑制率均为 0。结果表明泰万菌素对鸡胚中的MS 具有抑制作用，作用 3 日，与对照组相比差异均不显著；药物作用 5 日与对照组相比差异极其显著，表明药物作用时间越长，对鸡胚中MS 的抑制作用越强。药物未能全部杀灭鸡胚中的 MS，其原因可能是受鸡胚内环境的影响，需提高用药剂量或延长药物作用时间。
药物治疗可降低经蛋传染水平。研究表明，使用泰乐菌素和庆大霉素浸蛋或注射的方法对蛋进行处理 [6] ，或加热处理 [7] 种蛋等方法可防止种禽群的 MS 经蛋传递。本研究表明，在 SPF 鸡胚感染 MS 后注射泰万菌素可抑制 MS 的增殖，但是泰万菌素的使用剂量和作用时间还需进一步研究。
参考文献
[1]丁美娟，尹秀凤，黄显明，等.鸡滑液囊支原体病研究进展[J].中国家禽，2013,35（13）：39-41.
[2]Higgins, P.A.,Whithear, K.G. Detection and dif-ferentiation of Mycoplasma gallisepticum and M.synoviae antibodies in chicken serum using en-zyme-linked immunosorbent assay [J]. Avian Dis1986.30, 160-168.
[3] Landman W J,Feberwee A. Longitudinal field study on the occurrence of Mycoplasma synoviae in Dutch tyrkey flocks with lameness and experimen-tal induction of the condition [J]. Avian Pathol,2012, 41(2):141-149.
[4] Camaghan R B A.Egg transmission of infectious synovitis[J]. J Comp Pathol, 1961, 71:279-285.
[5]陆承平.兽医微生物学（第 3 版）[M].北京：中国农业出版社，2001,367-369.
[6] Nascimento, E.R., and M.G.F. Nascimento.1994. Eradication of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae from a chicken flock in Brazil. Proc West Poult Dis Conf. 43:58-59.
[7]Yoder, H.W., Jr. Preincubation heat treatment of chicken hatching eggs to inactivate mycoplasma[J]. Avian Dis. 1970. 14:75-86.
作者：韩相敏1 ，文丽2 ，高俊锋 1 ，马晶晶 1 ，吴碧清 1 ，赖志1 ，胡思顺 *3（1. 龙阔(上海)生物工程有限公司，上海 201619，2.浙江伊科拜克动物保健品有限公司，上海 201101，3.华中农业大学，武汉 430070）
