河南省某地方品种鸡场禽白血病净化效果探讨

基于河南省某地方品种鸡场禽白血病病毒 (Avian LeukosisVirus,ALV)感染状态调查结果,选择其核心鸡群开展净化初步研究。经过 2 个世代的净化,ALV-p27 抗原阳性率由 20.06%下降到 4.73%;ALV-A/B 抗体阳性率由 27.17%降低到 5.43%;ALV-J 抗体阳性率由17.39%降低到 6.52%;ALV 分离阳性率由 13.04%降低到 2.17%。以上结果表明该净化方案初步取得成效,可为其他地方品种鸡开展禽白血病(AL)净化工作提供参考。

禽白血病(AL)是由禽白血病病毒(ALV)引起的通过种蛋垂直传播的肿瘤性疾病,是目前危害我国养禽业发展的重要疫病之一 [1-2] 。该病已在全球许多国家发生和流行,早期 ALV-A、ALV-B 是引起鸡群淋巴性白血病和各类型肿瘤的主要亚群,自 1999 年杜岩等首次在我国肉鸡中检出 ALV-J 后,相继在蛋鸡和地方品系鸡中发现 ALV-J 的流行 [3-7] 。本课题组利用 2 年时间对河南省地方品种鸡 ALV 的感染情况进行调查,结果发现 ALV-J 和 ALV-ALB 同时感染非常普遍,且临床肿瘤类型和病理变化呈多样化,ALV 与网状内皮增生症病毒( REV )的共感染现象也较多见 [8]

AL 目前尚无疫苗可供使用,其预防控制主要依赖种群的净化措施。目前国际上普遍被采用的 AL 净化金标准 [9] 为:核心群分别在 68、168 日龄采取血浆,接种 DF- 1 细胞,9 天后检测 ALV-p27 抗原,淘汰阳性鸡;对保留核心群种鸡的下一代所有刚出壳的雏鸡,检测其胎粪中的 ALV-p27 抗原,淘汰阳性鸡的所有家系成员,如此反复 4~5 个世代,直至达到净化。但我国大多数地方品种鸡场的规模和经济实力不够大,无力承受该净化程序的成本和代价。另外采用国际金标准净化要求的技术条件、人力成本、试剂成本及实验室仪器条件等都比较高。本研究以河南省某地方品种鸡为研究对象,先采取 ELISA 方法检测 ALV-p27 抗原,连续多代淘汰阳性鸡,将种群阳性率降低到一定水平以下,然后再接种 DF-1细胞进行病毒分离,以达到进一步净化的目的。

1、材料与方法

1.1 试验动物

来源于河南省某地方品种鸡场。

1.2 主要检测仪器和试剂

二氧化碳培养箱(Thermo 公司)、倒置显微镜、生物安全柜、酶标仪(Thermo 公司)、微量加样器、ALV- p27 抗原检测试剂盒(为 BioChek 公司产品)、ALV-A/B 和ALV-J 抗体检测试剂盒(为 IDEXX 公司产品)、DMEM 培养液(为 GIBCO 公司产品)、新生牛血清(为 GIBCO 公司产品)、胰酶、DF-1 细胞等。

1.3 检测方法

1.3.1 泄殖腔棉拭子 ALV-p27 抗原检测

采样前在样品管中加入 1mL 样品稀释液,用无菌棉签采集试验鸡泄殖腔棉拭子,与稀释液混匀后冷冻。反复冻融 2 次,检测前将样品恢复至 25℃,按照 BioChek 公司 ELISA 试剂盒的操作说明进行检测。

1.3.2 血清 ALV 特异性抗体的检测

采集试验鸡促凝血,4 000r/min 离心 10min分离血清,用稀释液将血清作 1:500 稀释,按照IDEXX 公司 ELISA 试剂盒的操作说明检测ALV-J 亚型及 ALV-A/B 亚型抗体。

1.3.3 病毒的分离

无菌操作采集试验鸡抗凝血,接种于已长成单层的 DF-1 细胞,37℃ 继续孵育 2h,弃上清液,更换为含有 1% 新生牛血清的 DMEM 培养液,在 37℃、5%CO 2 条件下继续培养 9 天。然后冷冻,反复冻融 2 次后,取细胞培养液用ELISA 试剂盒检测 ALV-p27 抗原。

1.4 净化程序和管理

1.4.1 核心鸡群禽白血病感染情况调查

为了解鸡群 ALV 的感染程度和感染类型,采集配套母系及父系核心群 163~170 日龄种鸡,每只鸡都戴好脚号,对号采集泄殖腔棉拭子,按照 BioChek 公司 ELISA 试剂盒的操作说明检测 ALV-p27 抗原并做好详细记录。抽样采集对应的血清和全血样品,血清按 IDEXX 公司ELISA 检测试剂盒的操作说明检测 ALV-J 和ALV-A/B 抗体,以确定鸡群白血病感染类型。全血样品进行 ALV 分离。

1.4.2 阴性鸡群的选留

淘汰第 1 世代 ALV-p27 抗原阳性鸡,剩下的阴性鸡只转入经过彻底消毒后的种鸡舍内,采用单笼饲养。

1.4.3 阴性鸡群的饲养管理

选择技术熟练并能独立完成本舍饲养管理工作的饲养人员,要求不得串舍、不参与其他鸡舍的工作。本鸡舍内的所有用具都要做好标记,不与其他鸡舍混用并定期消毒。鸡舍每 2 天用聚维酮碘或百毒杀溶液带鸡消毒 1 次,鸡舍周围每 2 天用 2%~4%氢氧化钠喷洒消毒 1 次。由专人负责人工授精工作,授精时要用一次性的输精枪头,每输完 1 次精后要洗手消毒,防止交叉感染。

1.4.4 阴性鸡群种蛋孵化管理

收留阴性鸡所产的种蛋进行孵化并做好详细记录。种蛋库在进种蛋前先用次氯酸钠进行喷洒消毒,再用甲醛进行熏蒸消毒,并每 2 天用0.05%百毒杀喷雾消毒 1 次。设专人单独挑选和码放种蛋,工作前先用 0.1%新洁尔灭洗手消毒。蛋车、蛋盘、孵化机和出雏机专用,用前应彻底冲洗干净,并用 0.05%百毒杀喷洒和甲醛熏蒸消毒。孵化室每 3 天用次氯酸钠喷洒消毒地面 1 次。出雏时用纸袋封装每只母鸡所产的种蛋并做好编号。雌雄鉴别由指定专人进行。出雏免疫时的针头要分开使用。

1.4.5 第 2 世代及以后各世代阴性鸡群的选留

出雏当天收集 1 日龄雏鸡胎粪进行ALV-p27 抗原检测。所有样品需要在出雏后24 h 内检测结束,若检测鸡结果为阳性,其家系应立即全部淘汰。检测结果为阴性者再接种马立克氏病疫苗。8 周龄抽样检测鸡群泄殖腔ALV-p27 抗原,淘汰阳性鸡只。23 周龄逐只检测泄殖腔 ALV-p27 抗原,淘汰阳性鸡。抽样进行 ALV-J、ALV-A/B 抗体检测及 ALV 分离。

2、结果与分析

2.1 第 1 世代核心种鸡群 ALV 感染情况

对核心鸡群的 1 256 只鸡,分别采集泄殖腔棉拭子,采用 ELISA 方法检测 ALV-p27 抗原,结果显示抗原阳性率为 20.06%(252/1 256)。随机采取 92 只鸡的血清,采用 ELISA检测样品中 ALV-A/B 和 ALV-J 抗体,结果显示 ALV-A/B 和 ALV-J 抗体阳性率分别为27.17%(25/92)、17.39%(16/92), 某些个体ALV-A/B 和 ALV-J 抗体均为阳性。随机采取46 只鸡的全血,进行 ALV 分离鉴定,结果显示ALV 分离阳性率为 13.04%(6/46)。试验结果说明,该核心鸡群 ALV 感染较严重,并且存在ALV-A/B 和 ALV-J 2 种或 3 种亚群同时感染可能。第 1 世代核心种鸡群检测结果见表 1。

2.2 第 2 世代鸡群 ALV 感染检测结果

2.2.1 第 2 世代雏鸡胎粪检测结果

出雏当天收集胎粪进行 ALV- p27 抗原检测,共检测雏鸡 2 936 只,其中抗原阳性鸡 30只,阳性率为 1.02%,检测结果见表 2。淘汰胎粪检测阳性个体所属家系,阴性家系个体集中隔离饲养。

2.2.2 第 2 世代鸡群 8 周龄 ALV 检测结果

8 周龄时随机采取 184 只鸡泄殖腔棉拭子,采用 ELISA 方法检测 ALV-p27 抗原,抗原阳性率为 1.09%(2/184),检测结果见表 2。

2.2.3 第 2 世代鸡群 23 周龄 ALV 检测结果

23 周龄时采集 2 640 只鸡泄殖腔棉拭子,检测 ALV-p27 抗原,其中抗原阳性鸡为 125只,阳性率为 4.73%。随机采取 92 只鸡的血清,检测样品中 ALV-A/B 和 ALV-J 抗体,结果抗体阳性率分别为 5.43%(5/92)、6.52%(6/92)。随机采取 46 只鸡的全血,进行 ALV 分离鉴定,结果显示病毒分离阳性率为 2.17%(1/46)。检测结果见表 2。

2.3 鸡群净化效果

经过 2 个世代的净化淘汰,第 2 世代鸡群泄殖腔 ALV-p27 抗原、A/B 亚群抗体、J 亚群抗体和病毒分离各检测项目阳性率均明显下降。具体表现为第 2 世代鸡群 23 周龄 ALV 检测结果与第 1 世代(163~170 日龄)相比 ALV-p27抗原阳性率由 20.06%下降到 4.73%,降低15.33%;ALV-A/B 抗体阳性率由 27.17%降低到5.43%,降低 21.74%;ALV-J 抗体阳性率由17.39%降低到 6.52%,降低 10.87%;ALV 分离阳性率由 13.04%降低到 2.17%,降低 10.87%。说明该鸡群禽白血病净化取得初步成效。

3、讨论

为了尽量减少 AL 对鸡群造成的损失,对该病的净化应从原种代开始。近几年,我国在禽白血病种群净化方面取得了一定的成效 [10-11] ,有许多可借鉴之处。但是由于不同的鸡场 ALV 的感染程度、感染类型有差异,不同品种的鸡群ALV 自然感染动态有差异,因此在制订净化方案前需对核心群祖代进行 ALV 感染情况调查,通过泄殖腔棉拭子、种蛋蛋清、血清抗体及病毒分离检测种鸡的带毒情况,之后确认净化方案,这样才能确保净化效率和最终净化效果,不能一概照抄照搬。雏鸡 1 日龄检测胎粪 ALV- p27抗原,能反映上一代鸡群 AL 的净化效果,而且有资料显示 1 只鸡胎粪带毒,则可能造成同一苗箱内运输的雏鸡有 20%~30% 鸡只感染ALV,因此根据 1 日龄检测 ALV 淘汰阳性鸡是较为重要的。本实验结果显示第二世代雏鸡胎粪 ALV-p27 抗原阳性率为 1.02%,说明第一世代鸡群净化效果是较好的。本实验选择 8 周龄进行抽样检测泄殖腔 ALV-p27 抗原,23 周龄全群检测泄殖腔 ALV-p27 抗原,是根据我们对该地方品种鸡 ALV 自然感染动态检测结果,分析鸡群排毒规律确定的。

本实验结果显示,经过 2 个世代净化,该地方品种鸡群 23 周龄抗原阳性率下降到 4.73%,净化效果显著,说明选择的净化方案是可行的。但是随着禽白血病净化工作的继续,ALV-p27抗原阳性率下降会越来越难,因此要求在净化时一定要选择质量可靠、信誉度高、重复性好的试剂盒,严格按操作规程进行检测。同时做好活疫苗的选择,加强鸡舍的生物安全管理和孵化管理。另外,采用 ELISA 方法检测 ALV-p27 抗原,其主要缺陷是无法区分内源性 ALV 和外源性 ALV,同时还无法检测出所有的外源性 ALV[2,12] ,所以当种群 ALV-p27 抗原阳性率降低到一定水平以下,必须开展病毒的分离工作,以期实现彻底净化的目的。总之,禽白血病的净化是一个长期的、系统的工作,需要高度重视,持之以恒地坚持下去。

参考文献

[1] Saif Y M, Barnes H J, Glisson J R, et al. Disease of Poultry [M]. Iowa State University Press,2003:61-81.

[2]徐海鹏,孟凡峰,董宣,等.种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定[J].畜牧兽医学报,2014,45(8):1317-1323.

[3]孟祥凯,刘青,王海伦,等. 商品蛋鸡成髓细胞瘤、血管瘤型 J 亚群白血病病毒特性的研究[J].畜牧兽医学报,2008,39(11):1544-1547.

[4]Sun S, Cui Z. Epidemiological and pathological studies of subgroup J avian leukosis virus infections in Chinese local “yellow”chickens [J]. Avian Pathol,2007, 36(3): 221-226.

[5]崔治中.禽白血病病毒研究的过去、现在和将来[J].生命科学, 2012, 24(4):305-308.

[6]孙淼,李金彩,郭振华,等.J 亚型禽白血病病毒的分离与鉴定 [J]. 中国兽医杂志,2009 ,45(10):46-48.

[7]常维山,郭慧君,孙淑红.近年来我国禽白血病流行现状及发展趋势分析 [J]. 中国家禽, 2010,32(1):8-10.

[8]王建新,崔治中,张纪元,等. J 亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增生症病毒共感染对肉鸡生长和免疫功能的抑制作用 [J]. 中国兽医学报,2003,23(3):211-213.

[9]吴海冲,汤剑雄,尹会芳,等.福建某鸡场禽白血病的净化效果探讨 [J]. 畜牧与兽医,2015,47(5):105-107.

[10] 钱 琨,沈海玉,金文杰,等.苏皖地区规模化鸡场禽白血病净化的初步研究[J].中国家禽, 2012,34(5):8-11.

[11] 秦丽莉,吴元俊,王培坤,等.广西黑土鸡种群禽白血病净化防控效果研究[J].中国家禽, 2014,36(20):43 -45.

[12]王 波,李清源,刘绍琼,等.皖南黄肉种鸡种蛋中禽白血病病毒的感染状态检测[J].畜牧兽医学报,2011,42(2):224-227.

作者:张桂枝、靳双星*、黄炎坤、姬向波(河南牧业经济学院动物科技学院,郑州450046)

基金项目:河南省重大科技专项计划项目(161100510200);校科技 创新团队项目(HUAHE2015003)

作者简介:张桂枝(1970-),女,副教授,硕士,从事畜禽疫病防治的 教学与科研工作,通讯地址:郑州市郑东新区龙子湖北路 6 号河南牧业 经济学院动物科技学院,邮编 450046;E-mail: zhangguizhi666@126.com

* 通讯作者:靳双星(1970-)男,教授,硕士,从事畜禽疫病防治的教 学与科研工作,E-mail: jinshuangxing@126.com

责任编辑:曹伟胜

人已赞赏
试验研究

双黄连药理作用及其在家禽疫病防控的应用

2019-11-25 12:33:15

试验研究

1株台湾型鸡传染性支气管炎病毒的分离与初步鉴定

2019-11-26 12:00:39

0 条回复 A文章作者 M管理员
    暂无讨论,说说你的看法吧
个人中心
今日签到
有新私信 私信列表
搜索